Invitrogen™ LanthaScreen™ TR-FRET PPAR alpha Competitive Binding Assay Kit, goat

Description

Ce kit contient l’anticorps de chèvre anti-GST marqué au Tb ; les autres composants du kit sont les mêmes que pour le kit A15143 :

Le dosage de liaison compétitive LanthaScreen™ TR-FRET PPAR alpha offre une méthode sensible et robuste pour le criblage à haut débit (HTS) de ligands pour le récepteur alpha activé par les proliférateurs des peroxysomes (PPAR alpha). Le kit utilise un anticorps anti-GST marqué au terbium, un ligand pan-PPAR à petite molécule, fluorescent (Fluormone™ Pan-PPAR Green) et un domaine de liaison au ligand (LBD) PPAR alpha humain, marqué à la glutathione S-transférase (GST), dans un format homogène de dosage de type mélange et lecture.

Pour doser :
Lors de l’exécution du dosage de liaison compétitive LanthaScreen™ TR-FRET PPAR alpha, le Fluormone™ Pan-PPAR Green est ajouté aux composés de dosage des ligands, suivi de l’ajout d’un mélange de LBD PPAR alpha et d’anticorps anti-GST marqué au terbium. Lorsque le vert Pan-PPAR Fluormone™ est lié à l’alpha PPAR, le transfert d’énergie de l’anticorps marqué au terbium vers le traceur se produit et un rapport TR-FRET élevé est observé. La liaison compétitive du ligand à PPAR alpha est détectée par la capacité d’un composé de dosage à déplacer le traceur, ce qui entraîne une perte de FRET entre l’anticorps et le traceur. Après une période d’incubation à température ambiante, le rapport TR-FRET de 520 nm/495 nm est calculé et peut être utilisé pour déterminer la CI50 à partir d’une courbe de réponse de dose du composé (Figure 1). Ce type de dosage de liaison est analogue aux dosages à base de radioligand, sauf qu’il élimine la manipulation de la radioactivité et permet un format d’addition homogène uniquement.