Filtrer ou ne pas filtrer ?
De nombreux problèmes en chromatographie liquide haute performance (HPLC) peuvent être évités en restant attentif aux premiers signes d’alerte et en effectuant une maintenance régulière. La plupart des opérations de remplacement de pièces — comme le changement des joints de pompe — sont facilement identifiées comme des tâches d’entretien nécessaires ; cependant, la filtration de la phase mobile et des échantillons constitue également une pratique de maintenance essentielle.
La filtration des échantillons et de la phase mobile est une démarche simple et économique qui prolonge la durée de vie des consommables d’un système HPLC, réduit l’usure de l’instrument et préserve son intégrité. En comprenant les conséquences d’une filtration inadéquate, les analystes peuvent repérer les signes précurseurs de problèmes liés à la filtration et éviter les coûts et les temps d'arrêt associés à des opérations de maintenance longues et à des remplacements de pièces coûteux.
Quel type de filtre choisir
L’injection d’échantillons propres prolonge la durée de vie de l’injecteur et de la colonne. Les échantillons sont débarrassés des particules et des bactéries à l’aide de filtres jetables pour seringues. Ces filtres existent en différents diamètres (4 à 25 mm) et tailles de pores (0,2 à 1,0 μm). Ils se composent d’une membrane enfermée dans un boîtier plastique et se raccordent à une seringue via un embout Luer. La filtration s’effectue en aspirant l’échantillon dans la seringue, en fixant le filtre, puis en expulsant le liquide filtré dans un flacon. Pour réduire les variations physiques et chimiques entre fabricants, il est recommandé d’acheter les filtres pour échantillons et phases mobiles auprès du même fournisseur.
Un filtre de 0,45 μm est généralement utilisé pour les applications HPLC, tandis qu’un filtre de 0,2 μm est préférable pour le retrait bactérien ou les applications UHPLC. Pour les échantillons très chargés en particules, Pall propose des dispositifs combinant un préfiltre à pores larges et une membrane à pores plus fins. Il existe également des filtres à faible fixation protéique et des filtres stériles. Les injecteurs HPLC sont disponibles sous différents formats : septum, dispositif stop-flow sans septum, ou encore valves manuelles ou automatisées — la valve d’injection étant la plus courante. Un injecteur doit garantir une injection reproductible.
La filtration des échantillons et des solvants empêche l’obstruction, les rayures et les fuites au niveau des raccords à faible volume de l’injecteur. Une obstruction du circuit ou de la ligne de purge entraîne une surpression et des difficultés de remplissage de la boucle. Les raccords à faible volume mort, situés entre la valve d’injection et la colonne pour limiter l’élargissement des pics, peuvent également se boucher. D’autres causes possibles de problèmes HPLC incluent des composants d’injection incompatibles ou endommagés, des volumes d’échantillon variables, des fuites et une pression système élevée. Avec une filtration adéquate, un injecteur correctement réglé et propre peut permettre jusqu’à 5 000 injections.
Le choix du filtre approprié nécessite de connaître la compatibilité filtre/solvant ainsi que les caractéristiques chimiques et physiques du filtre. Ces caractéristiques comprennent : la taille et la distribution des pores, l’épaisseur du filtre, les extractibles, le caractère hydrophobe ou hydrophile, les propriétés de fixation, la pyrogénicité, les débits gaz/liquide, la résistance à l’éclatement, l’autoclavabilité et la capacité nominale de rétention particulaire. Un filtre inadapté peut introduire des composés extractibles susceptibles de compromettre les résultats analytiques. En chromatographie, les conséquences potentielles peuvent inclure l’adsorption de l’échantillon, la coélution ou l’apparition de pics parasites.orption, coelution and extraneous peaks.
Comment choisir le bon filtre
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Votre application de filtration est-elle automatisée ou manuelle ?
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Quelle est la compatibilité chimique du filtre ?
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Quelle surface de filtration efficace (EFA) est nécessaire pour votre application ?
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Quelle taille de pores est requise pour une filtration efficace ?
Résumé
La filtration des échantillons et de la phase mobile est une pratique simple et économique qui peut prolonger la durée de vie des consommables HPLC. En comprenant comment une filtration adéquate bénéficie aux différentes composantes d’un système HPLC et en choisissant le filtre approprié, les laboratoires peuvent éviter les coûts et le temps liés à des réparations ou remplacements de pièces imprévus.
