Traitement aval des cellules T primaires à l’aide des centrifugeuses polyvalentes Thermo Scientific Pro

Caractéristiques de l’équipement adapté aux applications de fabrication de thérapies cellulaires

Sécurité et contrôle total : SECURE-Spin

Les centrifugeuses offrent un système avancé de gestion des utilisateurs en mode SECURE-Spin, dans lequel différents rôles et privilèges sont attribués aux utilisateurs afin de maintenir un contrôle sécurisé, une fonctionnalité qui soutient la conformité à la FDA 21 CFR Partie 11 (figure 1). Les fonctions avancées du mode SECURE-Spin permettent de :

• Enregistrer jusqu’à 120 personnes avec des identifiants et mots de passe uniques

• Attribuer des privilèges et rôles individuels à chaque utilisateur, avec différents niveaux d’autorité

• Suivre toutes les modifications apportées par les utilisateurs aux programmes ou paramètres grâce à une piste d’audit

Figure 1 : Exemple des étapes du système avancé de gestion des utilisateurs pour « réactiver » un profil utilisateur avancé.

Reproductibilité : La fonction ACE Integrator

La fonction Thermo Scientific™ Accumulated Centrifugal Effect™ (ACE™) Integrator est un modèle mathématique qui aide à transférer les applications et les paramètres entre centrifugeuses en modifiant automatiquement la durée de la course comme substitut du temps (figure 2).

La fonction ACE peut être activée en allant dans « Paramètres », puis « Commandes », avant de changer le mode de consigne en « Avancé ». Elle a été conçue pour garantir que différents lots d’échantillons reçoivent le même effet centrifuge souhaité, indépendamment du poids de l’échantillon, de l’âge de l’équipement ou de facteurs environnementaux tels que l’altitude (figure 3). Les avantages de son activation pour les centrifugeuses General-Purpose Pro comprennent :

• Aide à assurer le même effet centrifuge total accumulé, quelles que soient les conditions (durée de la course, charge du rotor et charge de l’échantillon)

• Offre des rendements reproductibles en compensant automatiquement les variations d’accélération par l’ajustement du temps de centrifugation

• Soutient la reproductibilité essentielle dans les thérapies cellulaires et géniques

Prévention de la contamination : ClickSeal™

Les couvercles de bioconfinement Thermo Scientific™ ClickSeal™ protègent les échantillons contre toute contamination croisée, permettant la centrifugation de différents échantillons dans une même course. En cas de déversement, l’échantillon reste contenu dans son godet, protégeant ainsi les autres échantillons, les utilisateurs et l’environnement du laboratoire. Les principales caractéristiques des couvercles ClickSeal sont:

• Conception ergonomique permettant une ouverture et une fermeture faciles d’une seule main, gauche ou droite

• Options d’étanchéité de bioconfinement adaptées au port de gants

• Utilisation simple pour tous les utilisateurs du laboratoire, éliminant les bouchons à vis multi-tours et les clips haute pression complexes

• Certification de bioconfinement par le National Institute for Health Protection, Porton Down, Royaume-Uni

L’état sanitaire en recherche et fabrication de thérapies cellulaires, en particulier pour les types cellulaires autologues, n’est pas toujours disponible, et la rapidité est essentielle pour garantir le succès. Ainsi, l’équipement de laboratoire doit être prêt à fonctionner parfaitement lorsque cela est nécessaire. Le bouton « État de fonctionnement » sur nos centrifugeuses suit et enregistre chaque alarme, notification d’alerte et cycle de vie du rotor (figure 4). Cela permet d’éviter les interruptions, essentielles à la continuité du processus.

Figure 4 : État détaillé de la centrifugeuse et du rotor sur l’écran d’état de fonctionnement.

Gestion du rotor : SMART-Spin™

Le système avancé de gestion des rotors SMART-Spin™ optimise l’accélération, la décélération et le déséquilibre de charge résiduel pour chaque option de rotor et de godet. Les centrifugeuses General-Purpose Pro permettent également un réglage précis des paramètres de centrifugation avec une haute précision (incréments de 1 rpm pour la vitesse et de 1 s pour la durée). De plus, des comportements d’accélération et de décélération doux permettent de maximiser l’intégrité du culot tout en maintenant l’efficacité du processus. Dans l’exemple ci-dessous, nous avons utilisé le profil d’accélération 9 et le profil de décélération 7 afin de minimiser la perte cellulaire et de maintenir la viabilité.

Viabilité et récupération des cellules T

Méthodes

Des cellules T primaires provenant de donneurs sains ont été transférées dans des tubes coniques de 50 mL et 500 mL à une concentration de 1 × 10⁶ cellules/mL. Le comptage cellulaire a été effectué à l’aide du dispositif Via2-Cassette™ et de l’instrument NucleoCounter™ NC-200™ (ChemoMetec ; Allerød, Danemark). Les récipients ont été centrifugés dans la centrifugeuse polyvalente Thermo Scientific™ Multifuge™ X4R Pro à 400 × g, à température ambiante pendant 10 minutes. La viabilité et la récupération des cellules T ont été déterminées après les étapes de lavage et de concentration.
Note : La concentration cellulaire de 1 × 10⁶ cellules/mL utilisée est quatre à cinq fois inférieure aux valeurs habituelles, afin de simuler un scénario de pire cas.

Results

Nos résultats indiquent que les deux types de récipients coniques, 50 mL et 500 mL, ont fourni des performances équivalentes pour la concentration des cellules T, avec une diminution minimale de la viabilité et des taux de récupération élevés (figure 5).

Figure 5 : Viabilité et récupération des cellules T.