Invitrogen™ Fast SYBR™ Green Cells-to-C_T™ Kit

Le kit Ambion Fast SYBRGreen Cells-to-C_T™ est une méthode rapide, facile et robuste qui permet de passer directement des cellules de culture aux résultats de PCR en temps réel. Une technologie de pointe de lyse cellulaire et de stabilisation d’ARN élimine complètement le processus de purification d’ARN laborieux et chronophage. Le kit contient suffisamment de réactifs pour 100 réactions. Le kit Fast SYBRGreen Cells-to-C_T contient l’ADN polymérase AmpliTaq™ Fast, UP, qui permet un démarrage à chaud instantané, minimisant ainsi la formation de produits non spécifiques grâce à une PCR en temps réel rapide.

• Comprend des réactifs optimisés pour fonctionner efficacement dès sa sortie de l’emballage
• La technologie Cells-to-C_T simple et efficace permet la préparation d’échantillons à température ambiante en seulement 7 minutes, y compris le traitement DNase
• Précision validée, reproductibilité exceptionnelle et sensibilité maximale de 10 à 100 000 cellules par échantillon ; résultats équivalents à ceux de l’ARN purifié
• RT-qPCR en 2 étapes

Valeur extraordinaire Le kit comprend des réactifs pour la préparation d’échantillons intégrés à un flux de travail complet et optimisé d’expression génétique comprenant des réactifs de transcription inverse et un Master Mix PCR de haute performance avec SYBRGreen.

Facilité extraordinaire Le protocole commence par une procédure de préparation simple d’échantillons de 7 minutes. D’abord, les cellules sont nettoyées dans du PBS, puis lysées en solution pendant 5 minutes à température ambiante ; le traitement par DNase peut être réalisé simultanément. La réaction de lyse est arrêtée et l’échantillon est alors prêt pour la transcription inverse ou la conservation à -20°C pendant 5 mois maximum. Étant donné que les échantillons peuvent être traités directement dans des plaques de culture (96 ou 384 puits), la manipulation des échantillons et le risque de perte des échantillons ou d’erreur de transfert sont minimisés, ce qui contribue à une reproductibilité plus élevée. Après la préparation de l’échantillon, une partie du lysat cellulaire est ajoutée à une réaction RT suivie d’une PCR en temps réel à l’aide du Master Mix inclus.

Performances extraordinaires Pour démontrer les performances du kit, des expériences répliquées ont été effectuées à l’aide de la purification d’ARN traditionnelle et de l’analyse PCR en temps réel, ou du kit Fast SYBRGreen Cells-to-C_T. Le kit montre des performances équivalentes aux résultats obtenus à l’aide d’ARN purifié pour l’analyse de 10 à 100 000 cellules. De plus, la sensibilité, l’efficacité et la plage dynamique ont été supérieures aux kits de lysat concurrents. Les échantillons préparés avec le kit ont été testés pour leur compatibilité avec diverses plateformes de PCR en temps réel, notamment celles d’Applied Biosystems, de Roche et de Bio-Rad.

Produit accessoire :
Le kit de contrôle SYBRGreen Cells-to-C_T (n° cat. 4402959) contient un ensemble de contrôle d’ARN Xeno™ et d’amorces et est recommandé pour surveiller l’efficacité de la lyse cellulaire et de l’inhibition de l’amplification dans les réactions Cells-to-C_T.

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