Invitrogen™ LeukoLOCK™ Total RNA Isolation System

Description

Le système d’isolement de l’ARN total LeukoLOCK™ est une méthode innovante pour le fractionnement cellulaire du sang total et la stabilisation et l’extraction de l’ARN total à partir de la population de leucocytes. Le kit est composé d’un kit de stabilisation et de fractionnement LeukoLOCK (également disponible séparément ; n° de cat. AM1933) et un kit d’isolement d’ARN total LeukoLOCK.

Le système LeukoLOCK est optimisé pour une utilisation avec du sang humain. Le sang est un stockeur d’informations cellulaires ; cependant, la présence d’ARNm de globine dans l’ARN préparé à partir de sang total peut interférer avec les applications de profilage d’expression en aval. Le système LeukoLOCK utilise une technologie de déplétion des leucocytes à base de filtres pour isoler les leucocytes du sang total et la solution RNAlater™ pour stabiliser les cellules sur le filtre. En excluant les globules rouges, l’ARN purifié à partir des leucocytes capturés est intrinsèquement appauvri en ARNm de globine, ce qui améliore l’utilité des échantillons pour le profilage d’expression et d’autres applications.

Capture et stabilisation des leucocytes
Un échantillon de 9 à 10 ml de sang anticoagulé passe par un filtre LeukoLOCK, qui capture la population totale des leucocytes tout en éliminant les globules rouges (y compris les réticulocytes), les plaquettes et le plasma. Après le rinçage avec une solution saline tamponnée au phosphate, le filtre est rincé avec la solution RNAlater pour stabiliser l’ARN dans les leucocytes capturés. L’ARN peut être isolé immédiatement ou les cellules stabilisées peuvent être maintenues pendant plusieurs jours à température ambiante ou pendant des périodes plus longues à –20°C ou –80°C.

Isolement de l’ARN
La purification de l’ARN est effectuée en perturbant d’abord les cellules capturées dans une solution à base dethiocyanate de guanidinium qui libère l’ARN tout en inactivant simultanément les nucléases. Le lysat cellulaire est prélevé et traité brièvement avec de la protéinase K. L’ARN est ensuite purifié à partir du lysat à l’aide de la technologie à base de microbilles magnétiques MagMAX pour le lavage, suivi du traitement par DNase (avec DNase TURBO™) et du nettoyage final.

Études d’expression
Les études d’expression de biopuces et de RT-PCR quantitatives ont validé la pertinence de l’ARN purifié pour un profilage fiable des transcriptomes. Par rapport à l’ARN traité avec une procédure d’isolement d’ARN sanguin couramment utilisée, l’ARN isolé avec le système LeukoLOCK produit un ARNa médian plus long après amplification et un pourcentage plus élevé d’appels présents sans nécessiter d’autres étapes de post-extraction pour éliminer l’ARNm de globine. Comme l’ARNa de globine représente 25 à 40 % du pic d’ARNa provenant de l’ARN total du sang total, le rendement de l’ARN total est naturellement plus faible avec les méthodes qui épuisent les transcripts de globine indésirable. L’ARN amplifié après la purification LeukoLOCK offre une plus grande sensibilité de la matrice en raison de la réduction spectaculaire des transcripts de globine concurrente.

Rendements du kit
La récupération varie d’un donneur à l’autre, mais elle est généralement de 10 à 20 μg d’ARN par 9 à 10 ml de sang total. L’ARN récupéré à l’aide du système LeukoLOCK contient moins d’un dixième de la quantité d’ARNm de globine alpha et bêta dérivés de réticulocytes présents dans des échantillons d’ARN typiques provenant de sang total non fractionné.

• Fractionne les leucocytes du sang total en quelques minutes
• Extrait l’ARN total des leucocytes
• Aucune étape supplémentaire de réduction de globine n’est requise
• Stabilise l’ARN pour préserver le profil d’expression.
• Préserve les leucocytes à température ambiante pendant plusieurs jours.

Non compatible avec des cadences élevées (manuel)

Purification et analyse de l’ADN et de l’ARN, extraction de l’ARN, isolement de l’ARN total, ARN total des cellules et tissus animaux, ARN total du sang