Invitrogen™ Inhibiteur de RNase Ambion™, cloné, 40 U/μl

L’inhibiteur d’ARNase Ambion, une protéine humaine recombinante produite par la bactérie E. coli, est un puissant inhibiteur des enzymes de type RNase A pancréatiques neutres. Le mode d’inhibition est non compétitif ; l’inhibiteur lie étroitement les ARNases selon un ratio 1 : 1. On a démontré que l’enzyme inactivait les RNases présentes dans de nombreux tissus et types de cellules. L’ajout de l’inhibiteur de ribonucléase (IR) s’est avéré utile chaque fois que l’intégrité de l’ARN devait être maintenue, notamment dans la préparation de l’ADNc par transcription inverse, par transcription in vitro de l’ARN et par synthèse protéique in vitro. L’IR n’inhibe pas la RNase I, T1, T2, H, U1, U2 ou CL3. L’IR nécessite un minimum de 1 mM de DTT pour maintenir son activité et présente une plage d’activité entre 5,0 et 8,0 de pH avec une activité maximale comprise entre 7,0 et 8,0 de pH. Le mode d’inhibition reposant sur la formation d’un complexe 1 : 1 avec des ARNases, il faut veiller à éviter toute dénaturation ou oxydation de l’inhibiteur de ribonucléase (par exemple, par l’ajout de SDS, d’urée, etc.). L’IR doit être ajouté aux réactions de transcription, de traduction et de synthèse de l’ADNc pour donner une concentration finale de 1 U / μl. L’inhibiteur d’ARNase fait l’objet de tests rigoureux visant à détecter toute présence de RNase, d’endonucléase et d’exonucléase non spécifique contaminante et d’activité de protéase.
Définition d’une unité : Une unité est la quantité de protéine nécessaire pour inhiber l’activité de 5 ng de RNase A, de 50 %. Conditions de dosage de l’unité : 100 mM de Tris-acétate (pH 6,5), 1 mM d’EDTA, 1 mM de 2 pi, 3 pi-CMP cyclique et d’inhibiteurs d’ARNase. L’ajout de RNase A déclenche la réaction. L’activité inhibitrice de l’ARNase est mesurée par l’inhibition de l’hydrolyse de la CMP cyclique de 2 pieds, 3 pieds par la RNase A.

Applications :

Analyse de l’expression génétique et génotypage, transcription in vitro, PCR et PCR en temps réel, PCR en temps réel (qPCR), transcription inverse