Invitrogen™ Bac-to-Bac™ C-His TOPO™ Cloning Kit

L’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est une méthode efficace pour produire du baculovirus pour l’expression de protéines de haut niveau dans les cellules d’insectes. Elle repose sur la génération de virus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur la recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Nouveau : vecteurs pFastBacTOPO™ !


Expression fiable et rapide des protéines
Le système d’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est plus rapide et plus facile que l’expression traditionnelle du baculovirus. De plus, il maintient des niveaux élevés d’expression des protéines. Le Bac-to-Bac™ repose sur la génération de baculovirus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli plutôt que sur la recombinaison homologue dans les cellules d’insectes. Le système d’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est très apprécié dans la littérature académique. Il fait l’objet d’environ 100 citations par an depuis 2000 !

Les systèmes traditionnels de baculovirus nécessitent la purification et l’amplification d’un surnageant viral initial à faible titre. Cela nécessite un dosage sur plaque chronophage. Cependant, le vecteur pFastBac™ de Bac-to-Bac™ se recombine avec le bacmide parent dans les cellules compétentes E. coli DH10Bac™ pour former un bacmide d’expression. Transfectez le bacmide dans des cellules d’insectes pour une production rapide d’un titre élevé de particules de baculovirus recombinant pur dans la toute première transfection. Vous économiserez des semaines de temps précieux. Collectez un stock de baculovirus P2 pur au 10e jour sans devoir utiliser un dosage sur plaque fastidieux (voir figure 1)

Expression élevée, sélection facile
pFastBac™ utilise le promoteur de la polyédrine fort pour générer des niveaux élevés d’expression dans une variété de lignées cellulaires d’insectes telles que les cellules Sf9, Sf21 et High Five™.

Nouveaux ajouts :
Les vecteurs pFastBac de Bac-to-Bac™ sont désormais disponibles en tant que vecteurs pFastBacTOPO™. Les vecteurs pFastBacTOPO™ sont des vecteurs TOPO™ Blunt™ et sont fournis avec l’E. coli Mach1™-T1R pour un clonage facile et une propagation pFastBac ⁄ GOI rapide. Les nouveaux vecteurs vous offrent les avantages suivants :

Amplifiez votre gène d’intérêt (GOI) avec une enzyme PCR de la plus haute fidélité, comme Accuprime™ Pfx SuperMix.

Réalisez le clonage TOPO™ du produit PCR à extrémités franches dans le nouveau vecteur en seulement 5 minutes !

Visualisez les colonies 8 heures après le placage sur des plaques sélectives d’ampicilline, car les cellules d’E. coli Mach1™-T1R ont un temps de doublage plus rapide que d’autres souches de clonage standard.

Avec le kit de clonage ou d’expression C-His TOPO™ Bac-to-Bac™, vous pouvez produire une protéine hybride-His à extrémité carboxylique avec un site de clivage TEV pour purifier avec des résines de chélation de nickel (système de purification ProBond™ d’Invitrogen) et générer une protéine native à l’aide de la protéase AcTEV™ appréciée d’Invitrogen. C’est le seul vecteur d’Invitrogen qui contient un site de clivage TEV à extrémité carboxylique !

Les nouveaux vecteurs associent la technologie de clonage TOPO™ aux caractéristiques d’expression de baculovirus Bac-to-Bac™ hautement appréciées pour faciliter le clonage et l’expression de protéines de haut niveau.
Les vecteurs pFastBacTOPO™ sont proposés sous forme de kits de clonage et d’expression.