Invitrogen™ Bac-to-Bac™ HBM TOPO™ Cloning Kit

L’expression du baculovirus Bac-to-Bac™ est une méthode efficace pour produire du baculovirus pour l’expression de protéines de haut niveau dans les cellules d’insectes. Elle repose sur la génération de virus recombinant par transposition spécifique au site dans l’E. coli (DH10Bac™) plutôt que sur la recombinaison homologue dans des cellules d’insectes. Le nouveau vecteur pFastBac™ HBM TOPO™ permet l’expression de protéines sécrétées, car il possède le signal de sécrétion de la mélittine d’abeille (HBM). Le nouveau vecteur doit être fortement considéré pour l’expression des glycoprotéines. Les glycoprotéines ne peuvent pas être glycosylées en l’absence de tout signal de sécrétion. Contrairement aux glycoprotéines sécrétées par les cellules de mammifères, les glycoprotéines sécrétées par le baculovirus peuvent facilement être déglycosylées in vitro. C’est une caractéristique très importante pour cristalliser les protéines !

Le vecteur pFastBac™ HBM TOPO™ possède également une extrémité C-terminale His-Tag avec un signal de clivage TEV pour faciliter la purification des protéines de fusion histidine sur des résines chélatrices au nickel (Système de purification PROBOND™) et des protéines natives à l’aide de la protéase AcTev™.
Le vecteur utilise le promoteur de polyédrine puissant pour générer des niveaux élevés d’expression dans diverses lignées cellulaires d’insectes, telles que les cellules Sf9, Sf9 Mimic™, Sf21 et les cellules High Five™ dans les milieux Sf-900 II & Sf-900™ III de Gibco.

Les systèmes traditionnels de baculovirus nécessitent la purification et l’amplification d’un surnageant viral initial à faible titre. Cela nécessite un dosage sur plaque chronophage. Cependant, les vecteurs pFastBac™ de Bac-to-Bac™ se recombinent avec le bacmide parent dans les cellules compétentes DH10Bac™ E. coli pour former un bacmide d’expression. Transfectez le bacmide dans des cellules d’insectes pour une production rapide d’un titre élevé de particules de baculovirus recombinant pur dans la toute première transfection. Vous économiserez des semaines de temps précieux. Collectez un stock pur de baculovirus P2 le jour 10 sans la nécessité d’un dosage fastidieux des plaques.