Invitrogen™ BACE1 (β-Secretase) FRET Assay Kit, red

BACE1 (β-secrétase) est une enzyme clé impliquée dans la production de bêta-peptides amyloïdes (Abêta) présents dans les plaques amyloïdes extracellulaires de la maladie d’Alzheimer (AD). Dans certains cas, l’AD familiale précoce peut être attribuée à une mutation suédoise au sein de la protéine précurseur amyloïde (APP), ce qui améliore considérablement le clivage de cette protéine par BACE1. Cette preuve génétique et d’autres preuves pathologiques ont conduit à des approches thérapeutiques axées sur l’inhibition de BACE1 et d’autres enzymes de clivage APP, telles que la gamma-secrétase. Le kit de dosage de transfert d’énergie par résonance de fluorescence (FRET) du BACE1 fournit une méthode sensible et efficace pour la sélection des inhibiteurs potentiels BACE1. Ce kit utilise le BACE1 purifié exprimé par baculovirus et un nouveau substrat peptidique de FRET rouge basé sur le mutant suédois.

Le kit de dosage de FRET du BACE1 offre :

Émission rouge pour réduire l’interférence des composés

Excitation à 545 nm et émission à 585 nm

Un dosage facile à utiliser, rapide et homogène qui est exécuté en solution

Formatage polyvalent pour une sélection à haut débit

Résultats stables : des mesures peuvent être effectuées pendant au moins 24 heures

Le principe du dosage de FRET du BACE1 est le suivant : Le substrat peptidique est synthétisé avec deux fluorophores, un donneur fluorescent (un dérivé de rhodamine (Rh)) et un accepteur exclusif d’extinction. La distance entre ces deux groupes a été sélectionnée pour que, lors de l’excitation par la lumière, l’énergie de fluorescence du donneur (D) soit significativement absorbée par l’accepteur (A) par un phénomène mécanique quantique connu sous le nom de transfert d’énergie de résonance (figure 1). Lors du clivage par la protéase, le fluorophore est séparé du groupe d’extinction, ce qui rétablit le rendement de fluorescence complet du donneur. Ainsi, un substrat peptidique faiblement fluorescent devient très fluorescent lors du clivage enzymatique ; l’augmentation de la fluorescence est linéairement liée au taux de protéolyse.

Source de l’enzyme BACE1 :
une séquence d’ADNc codant les acides aminés 1-460 du BACE1 humain, correspondant à l’ectodomaine, a été exprimée dans des cellules d’insectes recombinantes infectées par le baculovirus. Le BACE1 purifié existe sous forme de proBACE1 ayant un poids moléculaire apparent de 55 kDa et une séquence du TQHGIRLPLR à l’extrémité N-terminale.