Invitrogen™ BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression System with EmGFP

Les kits de vecteur d’expression BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector combinent les avantages des vecteurs d’ARNi traditionnels (expression stable et capacité à utiliser la distribution virale) avec des capacités d’expression spécifique aux tissus et de transfert de cibles multiples à partir de la même transcription Les kits vecteurs d’expression BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector et les systèmes d’expression BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi Expression Systems sont conçus pour exprimer des miARN artificiels conçus pour avoir une homologie à 100 % de votre séquence cible et se traduiront par un clivage cible. En utilisant le Designer RNAi primé BLOCK-iT™ Invitrogen, plus de 70 % des structures produisent plus de 70 % d’inhibition. La famille de vecteurs d’expression Invitrogen Pol II comprend :

–Une forte expression du promoteur immédiat CMV, avec l’utilisation optionnelle d’EF-1α, des promoteurs spécifiques aux tissus ou d’autres promoteurs via la recombinaison MultiSite Gateway™.
–Compatibilité avec de nombreux vecteurs de destination (DEST) Invitrogen Gateway™ pour l’expression génétique.

–Possibilité de contrôler l’initiation de la réponse ARNi avec un nouveau kit vecteur d’expression ARNi miR Pol II inductible BLOCK-iT™ with EmGFP (réf. K493900).
–Un nouveau vecteur de destination dans le système d’expression avec EmGFP BLOCK-iT™ HiPerform™ Lentiviral PolII miR RNAi Expression System. Le nouveau vecteur contient une séquence de stabilisation de l’ARNm (WPRE) et une séquence d’importation nucléaire (CPPt) qui génèrent jusqu’à 5 fois plus de titres de virus et de niveaux d’expression de l’EmGFP. De plus, la résistance à la blasticidine est exprimée par le promoteur PGK-1 de souris pour éviter l’arrêt après plusieurs passages.

–Expression co-cistronique du GFP Emeraude (EmGFP), qui entraîne une corrélation entre l’expression de l’EmGFP et l’inhibition de votre ARNi miR.

–Expression de plus d’une séquence développée de l’ARNi miR sur la même transcription, permettant l’inhibition simultanée de plusieurs gènes et la génération de phénotypes synthétiques.

Le nouveau kit de vecteurs d’expression BLOCK-iT™ Inducible Pol II miR RNAi Expression Vector Kit with EmGFP permet de réguler les expériences ARNi. Ce kit contient le vecteur pT-REx-DEST30 Gateway™ qui, après des techniques simples de clonage et d’obturation, produit un vecteur d’expression ARNi miR adapté à l’inhibition inductible. Le vecteur pT-REx-DEST30 Gateway™ contient le promoteur CMV avec deux copies de la séquence opérateur de tétracycline (tetO2) permettant une expression à haut niveau et régulée. Cela permet d’étudier la perte de fonction dans une lignée cellulaire transfectée de façon stable, même si le gène d’intérêt est essentiel. De plus, l’induction de l’expression de l’ARNi miR peut être interrompue afin que les changements phénotypiques puissent être mesurés lors de la récupération de la fonction génétique.

Pour une variété d’options d’expression, la cassette ARNi miR, qui contient des régions flanquantes de miR EmGFP (vecteur pcDNA™6.2-GW / EmGFP-miR uniquement) et un miARN homologue à la cible d’intérêt, peut être facilement déplacée dans une variété de vecteurs DEST. Ceci se produit par des réactions de recombinaison Gateway™ dans lesquelles la cassette ARNi miR est transférée dans un vecteur pDONR™ (réaction BP) puis dans un vecteur DEST (réaction LR) de choix. Le système HiPerform™ est doté du nouveau vecteur pLenti6.4 / R4R2 / V5-DEST pour les titres de virus élevés et l’expression EmGFP.