Invitrogen™ Kit de vecteur d’expression ARNi miR II de Pol II inductible BLOCK-iT™ avec EmGFP

Les kits vecteurs d'expression BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi combinent les avantages des vecteurs d’ARNi traditionnels (expression stable et capacité à utiliser la distribution virale) avec des capacités d’expression spécifique aux tissus et de transfert de cibles multiples à partir de la même transcription ™ Les kits vecteurs d'expression BLOCK-iT Pol II miR RNAi et™ les systèmes d'expression BLOCK-iT lentiviral Pol II miR RNAi sont conçus pour exprimer des miARN artificiels conçus pour avoir une homologie à 100 % de votre séquence cible et se traduiront par un clivage cible. En utilisant Invitroge’ns primé BLOCK-iT™ RNAi Designer, plus de 70 % des constructions produisent plus de 70 % de knockdown. La famille de vecteurs d'expression Invitrogen Pol II comprend :

–une forte expression du promoteur immédiat CMV, avec l'option d'utiliser des promoteurs spécifiques aux tissus ou autres promoteurs réglementés via la™ recombinaison MultiSite Gateway.
–Compatibilité avec de nombreux’™ vecteurs de destination (DEST) Invitroge ns Gateway pour l'expression génétique.

–Possibilité de contrôler l'initiation de la réponse RNAi avec un ™ nouveau kit vecteur d'expression BLOCK-iT inducible Pol II miR RNAi avec EmGFP.
–Un nouveau vecteur de destination dans™ ™ le système d'expression BLOCK-iT HiRExécuter Lentiviral PolII miR RNAi avec EmGFP. Le nouveau vecteur contient une séquence de stabilisation de l'ARNm (WPRE) et une séquence d'importation nucléaire (cPPT) qui génèrent jusqu'à 5 fois plus de titres de virus et de niveaux d'expression de l'EmGFP. De plus, la résistance à la blasticidine est exprimée par le promoteur Pgk-1 de la souris pour éviter l'arrêt par défaut après plusieurs passages.

–Expression co-cistronique du GFP Emeraude (EmGFP), ce qui entraîne une corrélation entre l'expression de l'EmGFP et le knockdown de votre ARNi miR.

–Expression de plus d'une séquence développée de la miR RNAi sur la même transcription, permettant la mise en panne simultanée de plusieurs gènes et la génération de phénotypes synthétiques

Le ™ nouveau kit de vecteurs d'expression BLOCK-iT inducibles Pol II miR RNAi avec EmGFP permet de réguler les expériences RNAi. Ce kit contient le™ vecteur passerelle pT-Rex-DEST30 qui, après des techniques simples de clonage et d'obturation, produit un vecteur d'expression miR RNAi adapté à la mise en panne inductible. Le™ vecteur passerelle pT-Rex-DEST30 contient le promoteur CMV avec deux copies de la séquence opérateur de tétracycline (tetO2) permettant une expression de haut niveau et régulée. Cela permet d'étudier la perte de fonction dans une lignée cellulaire transfectée de façon stable, même si le gène d'intérêt est essentiel. De plus, l'induction de l'expression de la miR RNAi peut être interrompue afin que les changements phénotypiques puissent être mesurés lors de la récupération de la fonction génétique.

Pour une variété d'options d'expression, la cassette miR RNAi, qui contient des™régions de flanquement de miR (vecteur pcDNA 6.2-GW/EmGFP-miR uniquement), et un micro-ARN homologue à la cible d'intérêt, peut être facilement déplacée dans une variété de vecteurs DEST. Ceci se produit par™ des réactions de recombinaison Gateway dans lesquelles la cassette miR RNAi est transférée dans™ un vecteur pDONR (réaction BP) puis dans un vecteur DEST (réaction LR) de choix. ™ Le système HiPerform est doté du nouveau vecteur de destination pLenti6.4/RF R2/V5-DEST pour les titres de virus élevés et l'expression EmGFP.