Thermo Scientific™ CellSensor™ AP-1-bla A375 Cell Line

La lignée cellulaire CellSensor® AP1-bla A375 contient un gène rapporteur de la bêta-lactamase sous contrôle de l’élément de réponse AP1, intégré de manière stable dans les cellules A375. Les cellules A375 sont des cellules cancéreuses du mélanome humain qui contiennent la mutation endogène B-Raf V600E, entraînant une activité de la kinase B-Raf constitutive. La lignée cellulaire CellSensor® AP1-bla A375 est une population clonale isolée par cytométrie en flux basée sur l’expression constitutive de la bêta-lactamase. Cette lignée cellulaire a été validée avec divers inhibiteurs de Raf à petite molécule ainsi que B-Raf Stealth ARNi™ ARNsi. Cette lignée cellulaire a également été dosageée pour des performances de dosage dans des conditions variables, notamment la concentration de DMSO, le nombre de cellules, le temps d’incubation des composés et le temps de chargement des substrats, et validée pour le facteur Zfi et les concentrations de l’inhibiteur I Raf1. La famille de gènes RAF (RAF1, A-RAF, Et B-RAF) code des sérine/thréonine protéines kinases étroitement liées qui sont des effecteurs importants de l’activation de Ras. Les RAF1 et A-Raf sont rarement mutés, alors que les mutations dans B-Raf sont fréquentes dans les cancers humains, en particulier le mélanome. Le B-Raf est muté dans environ 70 % des mélanomes humains, 35 à 70 % des carcinomes thyroïdiens papillaires et moins fréquemment dans les carcinomes pulmonaires et colorectaux. Les mutations sont principalement dans le domaine de la kinase B-Raf et, dans les mélanomes, la grande majorité sont des mutations faux-sens V600E conduisant à l’activation de la kinase B-Raf. L’activité constitutive de B-Raf V600E peut conduire directement à l’activation de la voie de signalisation Mek/MAPK. Par conséquent, l’inhibition de la signalisation B-Raf/Mek/MAPK pourrait être un moyen potentiel de traitement des mélanomes et autres tumeurs avec le mutant B-Raf.