Molecular Probes™ Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 Protein Synthesis Assay Kit

Le kit de dosage de synthèse des protéines HPG Alexa Fluor™ 488 Click-iT™ fournit une méthode rapide, sensible, non toxique et non radioactive pour la détection de la synthèse de protéines naissantes à l’aide de la microscopie par fluorescence, de l’imagerie à haute densité ou de la cytométrie en flux. Le kit comprend de la L-homopropargylglycine (HPG), un acide aminé analogue à la méthionine contenant une fraction d’alcyne et de l’azoture Alexa Fluor™ 488. La HPG est chargée de cellules cultivées et incorporée dans des protéines pendant la synthèse active des protéines. L’ajout de l’azoture Alexa Fluor™ 488 conduit à une ligature chimiosélective ou à une réaction de “clic” entre l’azoture vert fluorescent et l’alcyne, permettant ainsi de détecter les protéines modifiées par une analyse basée sur des images.

Alternative en alternance non radioactive—à la ³⁵S-méthionine traditionnelle

Visualisation—des dynamiques de protéines en vrac : le marquage fluorescent des protéines permet de déterminer leur localisation, y compris l’agrégation

Spécificité—réaction spécifique et sélective entre le marquage et les balises de détection

Stabilité —le produit contient une liaison covalente irréversible

Activé en multiplex—utilisation conjointe à l’AHA (acide aminé d’azoture et colorant d’alcyne) Click™-iT pour détecter les différences spatiales et temporelles

Applicabilité aux échantillons biologiques—détection simple ; sensibilité élevée et faible bruit de fond, quelle que soit la complexité

Le kit de dosage de synthèse des protéines HPG Alexa Fluor™ 488 Click-iT™ a été dosageé avec succès dans les cellules HeLa, A549 et U-2 OS avec une variété de réactifs qui inhibent la synthèse des protéines, notamment la cycloheximide et l’anisomycine. L’applicabilité de ces sondes afin de surveiller la dégradation des protéines a également été démontrée à l’aide d’inhibiteurs du protéasome (MG132 et Bortézomib) et de bloqueurs d’autophagie (chloroquine) dans les cellules HeLa.

En outre, en raison des différences dans la chimie Click-iT™ entre le kit d’analyses de synthèse de protéines Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 et Click™-iT AHA avec l’alcyne Alexa Fluor™ 594, ces réactifs peuvent être utilisés conjointement pour la détermination spatiale ou temporelle des différences de synthèse des protéines naissantes.