Thermo Scientific™ Kit de clonage par PCR CloneJET™ avec cellules compétentes DH10B

• Ce dossier comprend CloneJET kit de clonage PCR (20 ou 40 réactions) et DH10B Cellules compétentes qui sont optimisées pour une utilisation avec le kit et qui peuvent être directement transformées avec le produit de ligature

CloneJET Kit de clonage PCR
Un système avancé de sélection positive pour le clonage à haute efficacité des produits PCR générés avec toute ADN polymérase thermostable. Tout fragment d’ADN à extrémités franches ou adhérentes peut être cloné. Le kit fonctionne bien avec des fragments d’ADN phosphorylés et non phosphorylés. La ligature dans le vecteur de sélection positive inclus ne prend que cinq minutes, et son rendement est de plus de 99 % de clones recombinants. Les produits PCR à extrémités franches générés avec une enzyme corrective sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage.

Les produits PCR générés soit avec des ADN polymérases sans activité corrective soit avec des mélanges d’ADN polymérases doivent être débarrassés des extrémités avant la ligature dans une réaction de cinq minutes grâce à l’enzyme de coupe franche d’ADN, thermostable, fournie avec le kit. DH10B Les cellules compétentes sont optimisées pour une utilisation avec ce kit et peuvent être directement transformées avec le produit de ligature.

Contient le nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi pJET1.2/blunt. Le vecteur contient un gène d’enzyme de restriction létale qui est perturbé par ligature d’un insert d’ADN dans le site de clonage. Résultat : seules les cellules bactériennes avec plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules re-circularisées du vecteur pJET1.2/blunt auxquelles il manque un insert expriment une enzyme de restriction létale qui tue la cellule E. coli hôte après transformation. Cette sélection positive accélère de façon radicale le processus d’analyse des colonies et élimine les coûts supplémentaires liés à la sélection bleu / blanc.

• Rapide : clonage par PCR en cinq minutes seulement
• Efficacité maximale : 99 % de clones positifs
• Pas de bruit de fond de clonage : vecteur à sélection positive
• Polyvalent : idéal pour le clonage des extrémités franches ou adhérentes
• Économique : pas de sélection coûteuse de bleu / blanc

Applications :

• Clonage de produits PCR à extrémité franche ou à extrémité 3’ dA jusqu’à 10 kb
• Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction
• Séquençage d’ADN cloné
• Transcription in vitro et in vivo d’inserts clonés à partir du promoteur T7

DH10B Cellules compétentes
Cellules E.coli à haute efficacité et chimiquement compétentes. L'/Le/La DH10B souche appropriée pour le clonage d’ADN contenant de la méthylcytosine et de la méthyladine, ce qui permet de cloner efficacement l’ADN génomique procaryotique et eucaryotique. Ces cellules sont idéales pour la construction de bibliothèques d’ADNc à l’aide de vecteurs dérivés de plasmides. Génotype : F – mcrAΔ (mrr-hsdRMS-mcrBC)φ 80 lacZΔ M15Δ lacX74 recA1 endA1 araD139Δ (ara-leu)7697 galU galKλ – rpsL(StrR) nupG.

• Efficacité de transformation élevée : > 1 x109 pc/μg ADN de pUC19
• Convient aux applications de clonage courantes et à haut débit
• Deux réactions pratiques par emballage de flacons
• Le milieu S.O.C. Milieu de croissance inclus