Invitrogen™ Dynabeads™ mRNA DIRECT™ Purification Kit

Le kit Dynabeads® mRNA DIRECT™ est conçu pour l’isolement simple et rapide de l’ARNm polydénylé (polyA) pur et intact directement à partir de lysat brut de cellules et de tissus d’origine animale et végétale. L’ARNm isolé convient à toutes les applications en aval.

Avantages du kit Dynabeads® mRNA DIRECT™ :
• Rapide : la procédure en 15 minutes produit un ARNm pur et intact
• Isolement d’ARNm haute pureté : le meilleur choix en amont de la synthèse d’ADNc
• Isolement d’ARNm sensible : permet la synthèse de l’ADNc et la construction de bibliothèques d’ADNc à partir d’échantillons de départ ultra petits (permet la construction de bibliothèques d’ADNc à partir d’une seule cellule)

Présentation du système
Le protocole d’isolement repose sur l’appariement de base entre les résidus polyA à l’extrémité 3’ de la plupart des ARNm et les d’oligo (dT)₂₅ couplés par covalence à la surface des Dynabeads®. D’autres espèces d’ARN privées d’une queue polyA ne peuvent pas hybrider sur les microbilles et sont facilement éliminées. L’ARN ribosomal, l’ADN, les protéines et les petites molécules d’ARN (ARN de transfert, micro-ARN et petits ARN nucléolaires) ne se fixent pas aux microbilles et sont éliminés. Les agents inhibiteurs de RNase dans le tampon de lyse / liaison associés à des conditions strictes d’hybridation et de lavage garantissent l’isolement d’ARNm pur et intact à partir d’échantillons bruts riches en RNase, sans utiliser d’agents chaotropiques puissants. Les microbilles de purification d’ARNm ciblent et capturent spécifiquement le transcriptome d’ARNm à partir d’une variété extrêmement étendue d’échantillons de départ bruts (voir protocole). 1 mg de microbilles Dynabeads® d’oligo (dT)₂₅ (200 µl) peut lier jusqu’à 2 µg d’ARNm. Une cellule de mammifère type contient environ 10 à 30 pg d’ARN total, dont 1 à 5 % sont de l’ARNm.