Invitrogen™ Kit d’expression Pichia EasySelect™

Le kit d’expression EasySelect™ Pichia contient l’ensemble des composants nécessaires à la production de protéines dans les levures Pichia pastoris. Le kit EasySelect™ contient des souches de levures Pichia, des vecteurs d’expression et des réactifs qui permettent la transformation des cellules Pichia. La version avec l’antibiotique Zéocine™ permet de sélectionner facilement un nombre élevé de copies des variants transformés.

Avantages du système d’expression Pichia pastoris :
• Cultivez des cellules Pichia aussi facilement que E. coli
• Obtenez une densité cellulaire plus élevée qu’avec d’autres systèmes d’expression microbienne.
• Générez plus de protéines par cellule que d’autres systèmes d’expression microbienne.
• Profitez du traitement des protéines eucaryotes, du repliement des protéines et des modifications post-traductionnelles.
• Passez facilement de flacons agitateurs à une fermentation à l’échelle industrielle.

Un système d’expression de protéines éprouvé
Au cours de ces 30 dernières années, la levure Pichia pastoris a été utilisée par les laboratoires et les industries du monde entier pour produire des centaines de protéines différentes de nombreuses espèces, y compris humaines (Réf. 1, 2, 3). Pichia pastoris peut être cultivée aussi facilement que des bactéries (E. coli) ou des levures (Saccharomyces cerevisiae), mais offre de nombreux avantages par rapport à ces systèmes (Réf. 4). Pichia pastoris peut atteindre des densités cellulaires beaucoup plus élevées que les bactéries ou d’autres levures. Pichia pastoris est capable de se développer sur du méthanol comme seule source de carbone, ce qui permet de passer à des niveaux industriels de manière relativement peu coûteuse.

Le pouvoir du promoteur AOX1
Le kit d’expression EasySelect™ Pichia utilise le promoteur du gène d’alcool-oxydase Pichia 1 (AOX1) pour stimuler la production de votre protéine. Pichia pastoris est capable de se développer sur le méthanol comme seule source de carbone. Lorsqu’il se développe sur du méthanol comme seule source de carbone, l’ARMm AOX1 représente jusqu’à 5 % de l’ARNm total et l’enzyme AOX1 peut représenter jusqu’à 30 % du poids cellulaire (Réf. 5).

Le système d’expression EasySelect™ Pichia est fourni avec les vecteurs pPICZ et pPICZα. Les vecteurs pPICZ et pPICZα contiennent un site de clonage multiple (MCS) et permettent l’insertion de votre gène sous le contrôle du promoteur AOX1. Les vecteurs pPICZ et pPICZα contiennent également un “tag” c-Myc pour faciliter la détection et un “tag” polyhistidine (6xHis) pour faciliter la détection et la purification de votre protéine.

Étant donné que Pichia pastoris sécrète naturellement peu de protéines, vous pouvez utiliser la séquence de signalisation extracellulaire dans les vecteurs pPICZα pour forcer la sécrétion de votre protéine dans le milieu de culture afin de simplifier la purification en aval.

Intégration d’un nombre élevé de copies avec l’antibiotique Zéocine™ Antibiotique
Le kit d’expression EasySelect™ Pichia utilise l’antibiotique Zéocine™ pour sélectionner les cellules Pichia transformées. Les vecteurs pPICZ et pPICZα contiennent le gène de bléomycine de Streptoalloteichus hindustanus (Sh ble) qui confère une résistance à l’antibiotique Zéocine™. Les vecteurs pPICZ et pPICZα peuvent être intégrés de manière stable au génome Pichia. En augmentant la concentration en antibiotique Zéocine™, vous pouvez facilement sélectionner les clones qui présentent le plus grand nombre d’intégrants et les niveaux d’expression protéique les plus élevés.

Le kit d’expression EasySelect™ Pichia contient les composants suivants :
• Stabilisez vos flacons de souches Pichia pastoris et E. coli pour le démarrage de vos cultures.
• Solutions qui permettent de créer des cellules Pichiaaptes à la transformation.
• Vecteurs pPICZ et pPICZα pour la fusion de votre gène avec le promoteur AOX1.
• Amorces de séquençage pour confirmer l’insertion de votre gène dans les vecteurs pPICZ.
• Antibiotique Zéocine™ pour sélectionner les cellules Pichia transformées.

À des fins de recherche uniquement. Non destiné à être utilisé lors de procédures de diagnostic.

Liens connexes
• Affichez l’insert de produit pour les vecteurs pPICZ A, B, C (PDF).
• Affichez l’insert du produit pour les vecteurs pPICZα A, B, C (PDF).
• Affichez l’insert du produit pour l’antibiotique Zeocin™ (PDF).
• En savoir plus sur l’utilisation de Pichia pastoris dans les protocoles Pichia, 1re édition disponible chez Invitrogen.
• En savoir plus sur les autres systèmes d’expression Pichia Invitrogen.

Références

1. Cereghino JL, Cregg JM. Expression de protéines hétérologues dans la levure méthylotrophe Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production de protéines recombinantes dans des cultures fermenteuses de la levure Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. Août 2002;13(4):329-32. [PubMed]
3. Cregg JM. Introduction: distinctions between Pichia pastoris and other expression systems. Methods Mol Biol. 2007;389:1-10. [PubMed]
4. Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. Expression in the yeast Pichia pastoris. Methods Enzymol. 2009;463:169-89. [PubMed]
5. Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA. Functional characterization of the two alcohol oxidase genes from the yeast Pichia pastoris. Mol Cell Biol. 1989 Mar;9(3):1316-23. [PubMed]