Thermo Scientific™ Phosphatase alcaline thermosensible FastAP (1 U/μl)

Points clés

• Enzyme recombinante
• Déphosphorylation rapide – 10 minutes à 37°C
• Inactivation rapide et complète – 5 minutes à 75°C
• Digestion et déphosphorylation simultanées de l’ADN vecteur
• 100 % active dans l’enzyme de restriction et les tampons de PCR
• Un seul protocole pour tous les types d’extrémités d’ADN :
  • Saillies de 5’
  • Saillies de 3’
  • extrémités franches
  • nucléotides simples
• Purification PCR en conjonction avec Exo I
• Déphosphorylation des protéines

Applications

• Déphosphorylation de l’ADN vecteur de clonage afin d’éviter la recircularisation pendant la ligature
• Digestion et déphosphorylation simultanées de l’ADN vecteur
• Purification des produits de PCR : détérioration des nucléotides avant le séquençage des produits de PCR
• Déphosphorylation des terminaisons 5' des acides nucléiques avant le marquage à l’aide de la kinase polynucléotide T4
• Autres applications dans lesquelles la déphosphorylation des substrats d’ADN et d’ARN est nécessaire
• Déphosphorylation des protéines

Remarque

• La liaison de la phosphatase alcaline thermosensible FastAP à l’ADN peut entraîner un décalage des bandes dans les gels d’agarose. Pour éviter cela, incubez les échantillons avec une solution de colorants de charge d’ADN et SDS  6X  & à 65°C pendant 10 minutes et refroidissez-les sur de la glace avant l’électrophorèse.
• FastAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase est active sur tous les tampons d’enzymes de restriction et peut être ajoutée directement à l’ADN digéré. L’inactivation par la chaleur de l’enzyme de restriction avant la réaction de déphosphorylation n’est pas nécessaire.