Thermo Scientific™ Kit de clonage CloneJET PCR

De plus, tout autre fragment d’ADN aux extrémités tronquées ou cohésives peut être cloné. Ce kit convient parfaitement aux fragments d’ADN phosphorylés ou non phosphorylés. La ligature dans le vecteur à sélection positive inclus ne prend que 5 minutes et permet d’obtenir plus de 99 % de clones recombinants. Les produits issus de la PCR aux extrémités tronquées générés avec une enzyme de correction (par exemple, la polymérase Pfu) sont ligaturés directement dans le vecteur de clonage. Les produits issus de la PCR générés soit avec des ADN polymérases non correctrices (par exemple, la polymérase Taq) ou des mélanges d’ADN polymérases, sont tronqués avant la ligature en 5 minutes grâce à l’enzyme de troncature d’ADN thermostable fourni avec le kit. Toutes les souches de laboratoire courantes à base d’E. coli peuvent être transformées directement avec le produit de ligature.

Ce kit contient un nouveau vecteur de clonage à sélection positive prêt à l’emploi : pJET1,2 / blunt. Le vecteur contient un gène d’enzyme de restriction létale qui est perturbé par ligature d’un insert d’ADN dans le site de clonage. Résultat : seules les cellules bactériennes avec plasmides recombinants sont capables de former des colonies. Les molécules du vecteur pJET1,2 / blunt recircularisées expriment une enzyme de restriction létale qui éliminera la cellule E. coli hôte après transformation. Cette sélection positive accélère de façon radicale le processus d’analyse des colonies et élimine les coûts supplémentaires liés à la sélection bleu / blanc. Pour plus de commodité pour la cartographie et la manipulation de l’insert, le site de clonage multiple du vecteur de clonage pJET1,2 / blunt contient deux séquences de reconnaissance BglII à côté du site d’insertion. En outre, le vecteur contient un promoteur T7 pour la transcription in vitro et in vivo ainsi que pour le séquençage de l’insert.

• Rapide : clonage par PCR en 5 minutes seulement
• Efficacité optimale : > 99 % de clones positifs
• Pas de bruit de fond de clonage : vecteur à sélection positive
• Polyvalent : convient parfaitement au clonage d’extrémités tronquées ou cohésives
• Économique : pas d’analyse blanc / bleu coûteuse

Recommandées dans les cas suivants :

Clonage de produits issus de la PCR à extrémités franches ou à queue 3’-dA jusqu’à 10 kb ; Clonage de fragments d’ADN générés par des enzymes de restriction ; Séquençage d’ADN cloné ; Transcription In vitro et in vivo d’inserts clonés du promoteur T7

Remarque :

Avant l’électroporation, purifiez sur colonne le mélange de ligature en utilisant, par exemple, le kit de purification par PCR GeneJET, †K0701, ou extrayez-le au chloroforme. L’électroporation est inhibée par la présence de protéines et de sels dans le mélange.