Thermo Scientific™ Eco31I (BsaI) (10 U/μl)

5'...G G T C T C (N)₁▵...3'

3'...C C A G A G (N)₅▵...5'

Conditions pour une activité à 100 % :

• Tampon G 1X : Tris-HCl 10 mM (pH 7,5 à 37°C), MgCl₂ 10 mM, NaCl 50 mM et BSA 0,1 mg/ml
• Laissez incuber à 37°C

Tampon de stockage :

• Eco31I est fournie sous la forme suivante : Tris-HCl 10 mM (pH 7,5 à 25°C), KCl 200 mM, DTT 1 mM, EDTA 0,1 mM, BSA 0,2 mg/ml et glycérol 50 % (v/v)

Ligature et reclivage :

• Après une digestion en excès de 50 fois avec Eco31I, plus de 95 % des fragments d’ADN peuvent être ligaturés et recoupés

Effets de méthylation :

• Dam : ne se chevauche jamais ; aucun effet
• Dcm : possibilité de chevauchement ; clivage affecté
• CpG : possibilité de chevauchement ; clivage affecté
• EcoKI : ne se chevauche jamais ; aucun effet
• EcoBI : possibilité de chevauchement ; effet non déterminé

Digestion de l’ADN incorporé à l’agarose :

• Au moins 5 U de l’enzyme sont nécessaires pour une digestion complète d’1 μg d’ADN Lambda intégré à de l’agarose en 16 heures

Remarque :

Dosé à l’aide de l’ADN Lambda (dcm-) (#SD0021), l’un des deux sites de reconnaissance Eco31I de l’ADN Lambda étant difficile à cliver. Le clivage Eco31l est affecté par le chevauchement avec la méthylation dcm. Pour éviter la méthylation dcm, utilisez une souche dam,dcm- telle que GM2163 (#M0099). Une faible concentration en sels, une forte concentration en glycérol (> 5 %), un pH > 8,0 ou un large excès d’enzyme peut induire une activité Star. Eco31I clive en aval de son site de reconnaissance et peut générer n’importe quelle saillie de 5’ de base 4 souhaitée. Cette fonctionnalité est utile pour le clonage direct de produits de PCR.