Molecular Probes™ Fluo-4, AM, perméant aux cellules

Description

Les indicateurs marqués de calcium sont des molécules qui affichent une hausse de fluorescence lors de la liaison du Ca²⁺. Fluo-3 a été utilisé pour illustrer les dynamiques spatiales de la signalisation de Ca²⁺, dans les expériences par cytométrie de flux impliquant la photoactivation des chélateurs en cage, des seconds messagers et des neurotransmetteurs, et pour l’analyse pharmacologique cellulaire. Fluo-4 est un élément analogique de fluo-3 avec deux substituants de chlore remplacés par des fluorines, ce qui se solde par une excitation accrue de la fluorescence à 488 nm et ainsi des signaux supérieurs de fluorescence. Les cellules peuvent être chargées d’esters AM de ces indicateurs de calcium en ajoutant l’indicateur dissous directement aux boîtes de culture contenant les cellules cultivées. Ces indicateurs sont utiles pour les applications de fluorescence et de microscopie confocale, de cytométrie en flux et de criblage sur microplaques.

Spécifications de l’indicateur de calcium (AM Ester) :
• Marquage (Ex/Em de Ca²⁺–forme liée) : Fluo-4 (494/506 nm)
• Augmentation de l’intensité de fluorescence lors de la liaison Ca²⁺ : >100 fois
• K_d pour Ca²⁺ dans le tampon : ∼335 nM
• Démontrez une augmentation de la fluorescence lors de la liaison de Ca²⁺ avec peu de changement de longueur d’onde

Utilisation de TPEN pour contrôler les cations de métaux lourds
Par ailleurs, des indicateurs basés sur BAPTA tels que ceux-ci se lient à divers cations de métaux lourds (p. ex. Mn²⁺, Zn²⁺, Pb²⁺) avec une affinité nettement plus élevée que le Ca²⁺. Les perturbations des mesures du calcium, causées par la présence de ces ions, peuvent être contrôlées à l’aide du chélateur sélectif de métaux lourds TPEN (n° de cat. T1210).

Plus de choix pour les indicateurs de calcium fluorescents
Nous proposons une large sélection d’indicateurs de calcium Molecular Probes™ à utiliser dans divers scénarios expérimentaux. Pour en savoir plus, consultez les Indicateurs fluorescents de Ca²⁺ excités par une lumière visible - Section 19.3 dans le manuel Molecular Probes™.

Pour en savoir plus sur les indicateurs excitables par UV de Ca²⁺, les indicateurs protéiques de Ca²⁺, les conjugués des indicateurs de Ca²⁺ et les indicateurs de la fluorescence des autres ions métalliques (comme Mg²⁺, Zn²⁺), consultez les Indicateurs pour Ca²⁺, Mg²⁺, Zn²⁺ et autres ions métalliques - Chapitre 19 dans le manuel Molecular Probes™.

Nous recommandons de dissoudre dans du DMSO anhydre de haute qualité pour les concentrations mères de 1 à 5 mM.