Molecular Probes™ Fluo-4, AM, perméant aux cellules

Les indicateurs marqués de calcium sont des molécules qui affichent une hausse de fluorescence lors de la liaison au Ca²⁺. Fluo-3 a été utilisé pour illustrer les dynamiques spatiales de la signalisation de Ca²⁺, dans les expériences par cytométrie en flux impliquant la photoactivation des chélateurs en cage, des seconds messagers et des neurotransmetteurs, et pour le criblage pharmacologique cellulaire. Fluo-4 est un élément analogique de fluo-3 avec deux substituants de chlore remplacés par des fluorines, ce qui se solde par une excitation accrue de la fluorescence à 488 nm et ainsi des signaux supérieurs de fluorescence. Les cellules peuvent être chargées d’esters AM de ces indicateurs de calcium en ajoutant l’indicateur dissous directement aux boîtes de culture contenant les cellules cultivées. Ces indicateurs sont pratiques pour les applications de fluorescence et de microscopie confocale, de cytométrie en flux et de criblage de microplaques.

Caractéristiques de l’indicateur de calcium (esters AM) :
• Marquage (ex./ém. de la forme liée au Ca²⁺) : Fluo-4 (494/506 nm)
• Augmentation de l’intensité de fluorescence lors de la liaison au Ca²⁺ : >100 fois
• K_d pour Ca²⁺ dans le tampon : ∼335 nM
• Montre une augmentation de la fluorescence lors de la liaison au Ca²⁺ avec un faible décalage en longueur d’onde

Utilisation de TPEN pour contrôler les cations de métaux lourds
En outre, ces indicateurs BAPTA lient plusieurs cations de métaux lourds (par ex., Mn²⁺, Zn²⁺, Pb²⁺) avec une affinité nettement supérieure au Ca²⁺. Les perturbations des mesures du calcium causées par la présence de ces ions peuvent être contrôlées à l’aide du chélateur sélectif de métaux lourds TPEN (réf. catalogue T1210).

Plus de choix d’indicateurs de calcium fluorescents
Nous proposons une large sélection d’indicateurs de calcium Molecular Probes™ utilisables dans diverses expériences. Pour en savoir plus, consultez les Indicateurs fluorescents de Ca²⁺ excités par la lumière visible—Section 19.3 dans le manuel Molecular Probes™.

Pour en savoir plus sur les indicateurs de Ca²⁺ excitables par UV, les indicateurs protéiques de Ca²⁺, les conjugués des indicateurs de Ca²⁺ et les indicateurs fluorescents des autres ions métalliques (comme le Mg²⁺, Zn²⁺), consultez les Indicateurs de Ca²⁺, Mg²⁺, Zn²⁺ et autres ions métalliques—Chapitre 19 dans le manuel des Molecular Probes™.

Dans son état réduit, l’excitation et l’émission maximums de l’acide indécanoïque BODIPY™ 581/591 est de 581/591 nm ; après oxydation, la sonde transfère l’excitation et l’émission à 488/510 nm.

Nous recommandons la dissolution dans du DMSO anhydre de haute qualité pour les concentrations stockées de 1 à 5 mM.