Thermo Scientific™ Image-iT™ Fixative Solutions

Les solutions fixatrices Image-iT sont des solutions prêtes à l’emploi fournies dans divers formats pour répondre à différents besoins de recherche. Elles sont idéales pour une utilisation avec des protéines fluorescentes, telles que des GFP et des RFP, et d’autres fluorophores colorants de taille réduite. Plus besoin de mélanger des poudres fixatrices toxiques ou de diluer une solution concentrée avec un pH non optimal.  Ajoutez simplement ces solutions fixatrices aux cellules / tissus et laissez incuber pendant 10 à 15 minutes à température ambiante. Elles sont idéales pour une utilisation avec n’importe quelle méthode de détection basée sur des anticorps, y compris l’immunocytochimie (ICC), l’immunofluorescence (IF) et l’immunohistochimie (IHC).

Caractéristiques des solutions fixatrices Image-iT :
• Prêtes à l’emploi
• Des solutions fixatrices haute pureté et de qualité imagerie qui minimisent les artefacts de signal de bruit de fond
• Sans méthanol
• Optimisées pour le marquage des anticorps secondaires, la coloration de cellules fixées et l’immunohistochimie colorimétrique

Solutions fixatrices formaldéhyde ou paraformaldéhyde à 4 %
Le formaldéhyde et le paraformaldéhyde à 4 % sont les fixateurs les plus couramment utilisés pour l’immunocytochimie (ICC), l’immunofluorescence (IF) et l’immunohistochimie (IHC).  Le paraformaldéhyde à 4 % Image-IT™ dans un tampon au phosphate 0,1 M à un pH de 7,4 (réf. I28800) est fourni en boîte de dix flacons de 10 ml chacun. Le formaldéhyde à 4 % Image-iT™ dans un tampon PBS est fourni en flacons de 20 ml (réf. FB002) ou en boîtes de 5 x 20 ml (réf. N° R37814). Le paraformaldéhyde / formaldéhyde à 4 % dans un tampon au phosphate 0,1 M a une osmolarité inférieure d’environ 300 mOsm à celle du PBS, ce qui permet de maintenir la morphologie cellulaire avant que le fixateur n’ait la possibilité de fixer les compartiments cellulaires internes. Pour le paraformaldéhyde / formaldéhyde dans un tampon PBS ou phosphate, il suffit d’ajouter le fixateur aux cellules et de laisser incuber pendant 5 à 10 minutes à température ambiante. Lavez les cellules dans du PBS après incubation et passez à l’étape de blocage.

Solution fixatrice de paraformaldéhyde à 3 % et de glutaraldéhyde à 0,35 %
Ce mélange de paraformaldéhyde à 3 % et glutaraldéhyde à 0,35 % est une solution prête à l’emploi fournie dans un tampon au cacodylate de sodium 0,1 M sans méthanol. Yuan Qin, et al. (1) ont constaté que le paraformaldéhyde et le glutaraldéhyde, lorsqu’ils sont mélangés, préservent mieux la morphologie mitochondriale que lorsqu’ils sont utilisés individuellement.

Le paraformaldéhyde est une petite molécule qui pénètre rapidement dans les cellules / tissus et fixe les protéines et d’autres molécules. Le glutaraldéhyde est une molécule plus grande avec deux groupes d’aldéhyde réactifs qui augmentent le pouvoir de fixation et contribuent à créer de longues chaînes de glutaraldéhyde, générant une matrice. Cette capacité permet de préserver la localisation des protéines dans un environnement complexe tel que les mitochondries.

Pour fixer les cellules / tissus, il est recommandé de laisser incuber pendant 5 à 10 minutes à température ambiante. Avec le glutaraldéhyde, une autofluorescence accrue peut être observée en raison de la présence d’un nombre plus élevé de groupes d’aldéhyde réactifs. Pour réduire cette autofluorescence, il est recommandé de laisser incuber pendant environ 7 minutes avec de la glycine 0,1 M ou du borohydrure de sodium à 0,1 % (p/v) fraîchement préparé après la fixation, mais avant le blocage.

Solution fixative au glyoxal à 3 %
Le glyoxal à 3 % est une plus petite molécule que le formaldéhyde ou le glutaraldéhyde. Il pénètre rapidement les cellules / tissus, fixe les protéines et préserve mieux la morphologie cellulaire que le formaldéhyde (2). La solution fixative au glyoxal à 3 % est une solution fixative prête à l’emploi fournie dans deux flacons distincts : Composant A (92 ml) et composant B (8 ml) contenant de l’éthanol absolu, de la solution de glyoxal, de l’acide acétique et de l’eau. Dans un flacon vide, versez la solution A et B, mélangez-les et amenez le pH à 4,5 en ajoutant du NaOH 1 M. Une fois mélangée, cette solution doit être utilisée immédiatement. Pour fixer les cellules / tissus, laissez incuber les cellules / tissus à température ambiante pendant environ 10 minutes.

Références
1 : Qin Y, Jiang W, Li A, Gao M, Liu H, Gao Y, Tian X, Gong G. The Combination of Paraformaldehyde and Glutaraldehyde Is a Potential Fixative for Mitochondria. Biomolecules. 2021 May 10;11(5):711.
2 : Richter KN, et al. Glyoxal as an alternative fixative to formaldehyde in immunostaining and super-resolution microscopy. EMBO J. 2018 Jan 4;37(1):139-159.