Invitrogen™ Système d’expression d’ARNi BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR avec EmGFP

Élargit les applications potentielles de l’ARNi au-delà de celles d’autres systèmes rétroviraux traditionnels (Naldini, 1998). Le système d’expression BLOCK-iT Lentiviral Pol II miR RNAi avec EmGFP comprend :
o Un kit de vecteur d’expression BLOCK-iT Pol II miR RNAi pour la production d’un clone d’expression contenant un oligonucléotide double brin codant une séquence pré-miARN pour expression dans des cellules de mammifères. Le vecteur d’expressionBLOCK-iT Pol II miR RNAi (ADNc pcDNA™6.2-GW/ EmGFP-miR) offre un moyen rapide et efficace de cloner les duplex oligo codant une séquence cible de miARN souhaitée dans un vecteur contenant un promoteur Pol II (CMV) pour utilisation dans une analyse d’ARNi. Le vecteur d’expression BLOCK-iT Pol II miR RNAi est spécialement conçu pour permettre l’expression de séquences de miARN et contenir des séquences de flanquement miR spécifiques qui permettent un traitement correct du miARN.
o Expression co-cistronique d’un rapporteur GFP émeraude (EmGFP) dans le vecteur d’ADNc pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR, ce qui résulte en une très forte corrélation de l’expression EmGFP avec l’activité d’extinction de votre miARN
o Le vecteur pDONR™ 221 pour transférer la cassette d’expression de l’ARNpremi en plasmide d’expression lentivirale à l’aide la technologie Gateway™. La technologie Gateway est une méthode de clonage universelle qui tire parti des propriétés de recombinaison spécifiques au site du bactériophage lambda (Landy, 1989) pour offrir un moyen rapide et très efficace de déplacer votre séquence d’ADN d’intérêt dans plusieurs systèmes vectoriels.
o Un vecteur de destination pLenti6/V5-DEST dans lequel la cassette pré-miARN du clone d’expression est transférée à l’aide de la technologie Gateway. Ce plasmide d’expression contient des éléments qui permettent l’emballage de la construction en virions et le Marquage de résistance à la blasticidine pour la sélection de lignées cellulaires transduites de façon stable.
o Des mélanges d’enzymes Gateway BP et LR Clonase™ II qui facilitent le transfert de la cassette d’expression pré-miARN du vecteur d’expression dans le vecteur de destination pLenti6/V5-DEST.
o Composants du système lentiviral ViraPower pour la production d’un lentivirus incapable de réplication qui exprime de façon stable le miARN d’intérêt dans les cellules de mammifères divisantes et non divisantes. La technologie lentivirale ViraPower facilite l’administration très efficace, in vitro ou in vivo, d’un gène ou d’un ARN cible à des cellules de mammifères divisantes et non divisantes à l’aide d’un lentivirus incapable de réplication. Basée sur le système lentikat™ développé par Cell Genesys (Dull et al., 1998), la technologie lentivirale de ViraPower possède des caractéristiques qui améliorent sa biosécurité tout en permettant une expression de haut niveau dans une gamme plus large de types de cellules que les systèmes rétroviraux traditionnels.

clonage, clonage Gateway, shARN et miARM lentiviraux, ARNi, RNAi, recherche sur l’épigénétique et l’ARN non codant, ARNi à base de virus