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Invitrogen™ Système d’expression d’ARNi Block-iT™ Lentiviral Pol II miR
Description
Élargit les applications potentielles de l’ARNi au-delà de celles d’autres systèmes rétroviraux traditionnels (Naldini, 1998). Le système d’expression BLOCK-iT Lentiviral Pol II miR RNAi comprend :
o Un kit de vecteur d’expression BLOCK-iT Pol II miR RNAi pour la production d’un clone d’expression contenant un oligonucléotide double brin codant une séquence pré-miARN pour l’expression dans les cellules de mammifères. Le vecteur d’expression BLOCK-iT Pol II miR RNAi (ADNc pcDNA™6.2-GW/ miR) offre un moyen rapide et efficace de cloner les duplex oligo codant une séquence cible de miARN souhaitée dans un vecteur contenant un promoteur Pol II (CMV) pour utilisation dans une analyse d’ARNi. Le vecteur d’expression BLOCK-iT Pol II miR RNAi est spécialement conçu pour permettre l’expression de séquences de miARN et contenir des séquences de flanquement miR spécifiques qui permettent un traitement correct du miARN.
o Le vecteur pDONR™221 pour transférer la cassette d’expression du pre-miARN dans le plasmide d’expression lentivirale à l’aide de la technologie Gateway™. La technologie Gateway est une méthode de clonage universelle qui tire parti des propriétés de recombinaison spécifiques au site du bactériophage lambda (Landy, 1989) pour offrir un moyen rapide et très efficace de déplacer votre séquence d’ADN d’intérêt dans plusieurs systèmes vectoriels.
o Un vecteur de destination pLenti6/V5-DEST dans lequel la cassette pré-miARN du clone d’expression est transférée à l’aide de la technologie Gateway. Ce plasmide d’expression contient des éléments qui permettent l’emballage de la construction en virions et le Marquage de résistance à la blasticidine pour la sélection de lignées cellulaires transduites de façon stable.
o Des mélanges d’enzymes Gateway BP et LR Clonase™ II qui facilitent le transfert de la cassette d’expression pré-miARN du vecteur d’expression dans le vecteur de destination
pLenti6/V5-DEST.
o Composants du système lentiviral ViraPower pour la production d’un lentivirus incapable de réplication qui exprime de façon stable le miARN d’intérêt dans les cellules de mammifères divisantes et non divisantes. La technologie lentivirale ViraPower facilite l’administration très efficace, in vitro ou in vivo, d’un gène ou d’un ARN cible à des cellules de mammifères divisantes et non divisantes à l’aide d’un lentivirus incapable de réplication. Basée sur le système lentikat™ développé par Cell Genesys (Dull et al., 1998), la technologie lentivirale de ViraPower possède des caractéristiques qui améliorent sa biosécurité tout en permettant une expression de haut niveau dans une gamme plus large de types de cellules que les systèmes rétroviraux traditionnels.
clonage, clonage Gateway, shARN et miARM lentiviraux, ARNi, RNAi, recherche sur l’épigénétique et l’ARN non codant, ARNi à base de virus
Spécification
Spécification
| Type de produit | Kit de vecteurs d’expression RNAi |
| Contenu et stockage | Le système d’expression BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR RNAi contient le kit de vecteur d’expression BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi qui contient deux boîtes. La boîte de clonage contient de l’ADNc™pcDNA6.2-GW/miR linéarisé, 10x tampons d’hybridation, de la ligase d’ADN T4, 5X tampons de ligature d’ADN, de l’oligo de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle négatif, de l’eau exempte de DNase/RNase et des amorces de séquençage directes et inverses. Stockez les vecteurs, les tampons, l’oligo de contrôle et les plasmides, l’eau et les amorces de séquençage à -20°C. La boîte One Shot™ contient des réactifs de transformation comprenant vingt-et-une aliquotes de 50 µl de cellules d’E. coli chimiquement compétentes TOP10 One Shot™, un milieu S.O.C. et un plasmide de contrôle superenroulé pUC19. Stockez ces réactifs de transformation à -80°C. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation. Le système d’expression d’ARNi BLOCK-iT™ Lentiviral Pol II miR comprend également tous les réactifs nécessaires au clonage Gateway™ dans le système d’expression lentivirale, notamment : vecteur pLenti6/V5-DEST, contrôle pLenti6-V5/GW-lacZ, pDONR™221, kit de support Bsd lentiviral ViraPower™ (mélange d’emballage ViraPower™, réactif de transfection Lipofectamine™ 2000 et blasticidine), ligne cellulaire 293FT, E. coli chimiquement compétentes One Shot™ Stbl3™, E. coli chimiquement compétentes One Shot™ TOP10 et mélanges enzymatiques Gateway™ LR et BP™ II. Stockez le réactif Lipofectamine™ 2000 à +4°C (ne pas congeler). Stockez les vecteurs, le mélange d’emballage ViraPower™, la blasticidine et les deux mélanges d’enzymes Clonase™ II à -20°C. Stockez les cellules compétentes à -80°C. Stockez la lignée cellulaire 293FT dans de l’azote liquide. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation. |
| Méthode de clonage | Gateway™ |
| Système constitutif ou inductible | Vecteurs |
| Type de livraison | Lentiviral |
| Type d’ARNi | miARN |
| Agent de sélection (eucaryotique) | Blasticidine |
| Vecteur | pLenti |
| Accélérateur | CMV |
| Gamme de produits | BLOCK-iT, Gateway |
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