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Invitrogen™ BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi Expression Vector Kit
Description
Includes
Le kit de vecteur d’expression BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi contient deux boîtes. La boîte de clonage contient de l’ADNc pcDNA™6.2-GW/miR linéarisé, 10x tampons d’hybridation, de la ligase d’ADN T4, 5X tampons de ligature d’ADN, de l’oligo de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle négatif, de l’eau exempte de DNase/RNase et des amorces de séquençage directes et inverses.
Le vecteur d’ADNc pcDNA™6.2-GW/miR inclus dans le kit de vecteur d’expression BLOCK-iT Pol II miR RNAi est conçu pour exprimer des miARN artificiels qui sont modifiés pour avoir une homologie à 100 % de votre séquence cible et qui se traduira par un clivage cible. Ce vecteur comprend des séquences de flanquement et de boucle d’un miARN endogène qui dirige l’excision du miARN modifié à partir d’un produit de transcription de Pol II plus longue (pré-miARN). Grâce au concepteur primé BLOCK-iT RNAi d’Invitrogen, plus de 70 % des constructions produisent plus de 70 % d’extinction. L’expression POL II des miARN modifiés permet :
- Une forte expression du promoteur précoce immédiat CMV, avec la possibilité d’utiliser des promoteurs spécifiques aux tissus ou d’autres promoteurs réglementés via la recombinaison MultiSite Gateway™
- Une compatibilité avec de nombreux vecteurs de destination (DEST) Gateway d’Invitrogen ; comprend les vecteurs lentiviraux pour une transduction stable des types de cellules primaires, divisantes et non divisantes, le système FlpIn™ pour intégration chromosomique sur site unique et des constructions de fusion des rapporteurs alternatives
- L’expression de plus d’un miARN modifié sur la même transcription, ce qui permet l’extinction de plusieurs gènes simultanément et la génération de phénotypes synthétiques
Pour des niveaux d’expression élevés de votre séquence d’ARNi miR, le vecteur d’ADNc pcDNA6.2-GW/miR inclut le promoteur CMV. Il vous suffit d’entrer un numéro d’acquisition RefSeq ou une séquence de nucléotides dans le concepteur en ligne gratuit BLOCK-iT RNAi et le logiciel concevra des miARN optimisés qui ont 100 % d’homologie avec la cible d’intérêt. Clonez le miARN dans le vecteur à l’aide d’un protocole de ligature rapide et d’un transfect pour l’expression immédiate du miARN. Le miARN exprimé est traité par la machine cellulaire endogène dans le noyau (y compris Drosha) puis transporté dans le cytoplasme où il est ensuite traité par Dicer. Le miARN entièrement traité est ensuite incorporé dans le RISC où il fonctionne comme un siARN et résulte en un clivage de la cible d’ARNm.
Pour une variété d’options d’expression, la cassette miARN, les régions de flanquement miR et un miARN homologue à la cible d’intérêt peuvent être facilement déplacés dans plusieurs vecteurs DEST. Ceci se produit par des réactions de recombinaison Gateway dans lesquelles la cassette miARN est transférée dans un vecteur pDONR™ (réaction BP) puis dans un vecteur DEST (réaction LR) de votre choix.
clonage, clonage Gateway, RNAi, ARNi, recherche sur l’épigénétique et l’ARN non codant, ARNi vectoriel
Spécification
Spécification
| Type de produit | Kit de vecteurs d’expression ARNi |
| Contenu et stockage | Le kit de vecteur d’expression BLOCK-iT™ Pol II miR RNAi contient deux boîtes. La boîte de clonage contient de l’ADNc™pcDNA6.2-GW/miR linéarisé, 10x tampons d’hybridation, de la ligase d’ADN T4, 5X tampons de ligature d’ADN, de l’oligo de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle négatif, de l’eau exempte de DNase/RNase et des amorces de séquençage directes et inverses. Stockez les vecteurs, les tampons, l’oligo de contrôle et les plasmides, l’eau et les amorces de séquençage à -20°C. La boîte One Shot™ contient des réactifs de transformation comprenant vingt-et-une aliquotes de 50 µl de cellules d’E. coli chimiquement compétentes TOP10 One Shot™, un milieu S.O.C. et un plasmide de contrôle superenroulé pUC19. Stockez ces réactifs de transformation à -80°C. La stabilité de tous les réactifs est garantie pendant 6 mois, sous réserve d’une bonne conservation. |
| Méthode de clonage | Gateway™ |
| Système constitutif ou inductible | Vecteurs |
| Type de livraison | Transfection |
| Type d’ARNi | miARN |
| Agent de sélection (eucaryotique) | Blasticidine |
| Vecteur | Vecteurs BLOCK-iT RNAi |
| Accélérateur | CMV |
| Format | Kit |
| Afficher plus |
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