Invitrogen™ Dynabeads™ MyOne™ Tosylactivated

Pour établir un couplage covalent entre la surface d’une microbille magnétique et des anticorps, des peptides, des protéines intactes et des enzymes fonctionnelles, optez pour les microbilles Dynabeads® activées au tosyle. L’orientation optimale des anticorps fait de ces microbilles un excellent choix pour l’immunoprécipitation des protéines et des complexes protéiques.

Idéal pour l’immunoprécipitation des complexes protéiques :
La liaison covalente de fond faible des anticorps à la surface de la microbille fait des Dynabeads activées au tosyle un excellent choix pour l’immunoprécipitation des protéines et des complexes protéiques (co-immunoprécipitation, Co-IP). La concentration magnétique à la fois rapide et non agressive des microbilles et les courtes durées d’incubation (probablement dues à la rapidité de la cinétique de liaison en surface) font des microbilles Dynabeads activées au tosyle un excellent choix pour l’immunoprécipitation des complexes protéiques extrêmement labiles et/ou transitoires (à courte durée de vie).

Caractéristiques de surface de la microbille pour les Dynabeads activées au tosyle :

• groupes p-toluène-sulfonyle (Tosyle)
• Hydrophobe, pH neutre
• Liaison covalente assurée par des groupes d’amines primaires (NH₂) ou sulfhydryles (SH)

Protocoles ultra rapides :
• Identification des composants des complexes protéiques en quelques minutes plutôt qu’en quelques heures
• Résolution temporelle suffisamment courte pour permettre l’identification des complexes transitoires et labiles
• Identification des partenaires de liaison que des protocoles plus longs ne permettent pas d’identifier
• Protocoles rapides permettant de réduire la liaison de fond déjà très faible
• Rapports signal-bruit plus forts

Applications :
• IP de protéines et de complexes protéiques
• Couplage d’enzymes fonctionnelles à la surface des microbilles pour les dosages en aval
• Couplage des peptides à la surface des microbilles en vue d’identifier les liants

Purification des peptides, des protéines et des enzymes :
• affichant une stabilité transitoire
• intacts d’un point de vue structurel
• labiles sous l’effet de la température
• fonctionnels et dans leur conformation native

Description de la procédure de couplage :
le couplage covalent est effectué pendant la nuit en incubant le ligand désiré avec les Dynabeads activées au tosyle. Parmi les ligants fréquemment associés aux microbilles Dynabeads activées au tosyle figurent des peptides et des protéines, tels que des anticorps destinés à l’immunoprécipitation ou à la co-immunoprécipitation. Le couplage s’effectue à un pH neutre à élevé, et à une température de 37°C. Nous recommandons le couplage à pH 8,5 à 9,5, mais pour les ligands labiles pH, le couplage peut être effectué dans un tampon alternatif à pH 7,4.

À la fin de l’étape de couplage des ligands, le revêtement de surface des Dynabeads activées au tosyle sera rendu inerte, ce qui entraînera une faible liaison non spécifique.

Capacité de liaison par milligramme de microbilles :
varie en fonction du ligand (par exemple 14 à 19 µg d’IgG)

À propos de Dynabeads :
Les Dynabeads sont des microbilles monodispersées non poreuses superparamagnétiques. Elles sont très mobiles en solution, ce qui permet aux ligands couplés aux microbilles de continuer à interagir de façon continue avec l’intégralité du volume d’échantillon. Les microbilles superparamagnétiques sont attirées vers les parois du tube lors du transfert du tube dans un rack contenant un fort champ magnétique. De puissants champs magnétiques attirent rapidement les microbilles vers la paroi du tube, permettant ainsi l’élimination totale et facile du surnageant, à l’aide d’une pipette. Les étapes de lavage s’effectuent de façon similaire.