Invitrogen™ pENTR™/D-TOPO™ Cloning Kit, with One Shot™ Mach1™-T1^R Chemically Competent E. coli

• Les produits PCR à extrémités franches clonent directionnellement avec une efficacité supérieure à 90 %, sans nécessiter de ligase, de procédures post-PCR ou d’enzymes de restriction
• Les gènes clonés font rapidement la navette entre de multiples systèmes de vecteurs
• Des performances fiables
• Pour accéder au système Gateway, amplifier par PCR le gène d’intérêt et ajouter le produit directement au vecteur pENTR / SD / D-TOPO chargé de la topoisomérase fournie. Incuber 5 minutes et transformer les cellules E. coli compétentes fournies
• Les clones d’entrée Gateway ainsi obtenus et contenant les sites attL sont prêts pour une recombinaison efficace avec les vecteurs de destination Gateway de choix
• Le vecteur pENTR / D-TOPO comprend des sites de séquençage d’amorces M13 et T7 et des sites de recombinaison attL flanquant le site d’insertion du produit PCR. permettant ainsi aux clones d’être facilement vérifiés par séquence et recombinés dans le choix des vecteurs de destination Gateway contenant l’attR
• Un gène de résistance la kanamycine et une origine pUC sont utilisés pour la sélection et la propagation en nombre élevé de copies dans E. coli
• Une saillie à quatre bases sur les paires de vecteurs avec une séquence à quatre bases conçue dans l’amorce sens utilisée dans la réaction PCR afin de fournir de la directionnalité à la réaction de ligature à la topoisomérase
• Déplacer la même séquence d’ADN entre différents vecteurs sans utiliser d’enzymes de restriction, de ligase, d’étapes de sous-clonage, de sélection de colonies innombrables ou de re-séquençage

Clonage / clonage Gateway