Invitrogen™ Système de synthèse premier brin SuperScript™ pour la RT-PCR

Le système de synthèse premier brin SuperScript™ pour la RT-PCR est optimisé pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir de poly(A)+ purifié ou d’ARN total. Le système peut être utilisé avec une quantité aussi infime qu’1 ng ou aussi grande que 5 µg d’ARN total. Après la synthèse, l’ADNc peut être amplifié avec des amorces spécifiques par la PCR sans extraction organique intermédiaire ni précipitation à l’éthanol. En conjonction avec la PCR, le système peut être utilisé pour détecter la présence de messages rares, pour définir la quantité d’ARNm spécifique à partir d’un petit nombre de cellules, ou pour cloner des ADNc spécifiques sans construire une bibliothèque d’ADNc complète. Le système est souple et permet d’utiliser tous les enzymes de PCR. Associez-le à l’ADN polymérase AccuPrime™ Taq ou l’ADN polymérase Plarinum™ Taq pour une PCR de plus grande spécificité ou avec l’ADN polymérase AccuPrime™ Pfx pour des applications de clonage haute-fidélité.

RT SuperScript II RT
La réaction de synthèse d’ADNc premier brin est catalysée par la transcriptase inverse (RT) SuperScript™ II. Cette enzyme a été conçue pour réduire l’activité d’ARNase H qui détériore l’ARNm au cours de la réaction premier brin, ce qui a pour résultat une bien meilleure synthèse d’ADNc sur toute la longueur et des rendements plus élevés d’ADNc premier brin que ce qui est obtenu avec RNAse H+ RT. Dans la mesure où la SuperScript™ II RT n’est pas inhibée sensiblement par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, elle peut être utilisée efficacement pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir d’une préparation d’ARN total. L’enzyme présente une stabilité thermique accrue et peut être utilisée à des températures allant jusqu’à 50°C.

Utilisation du système de synthèse premier brin SuperScript™ pour la RT-PCR
Ce système a été optimisé pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir de quantités variables de matériaux de départ. La concentration de SuperScript™ II RT a été diminuée et l’inhibiteur d’ARNase recombinante RNaseOUT™ a été ajouté au système dans le cadre de ce processus d’optimisation. En outre, les conditions de réaction ont été modifiées pour augmenter encore plus la sensibilité du système. À l’aide du kit, synthétisez l’ADNc premier brin soit avec de l’ARN total ou ARN sélectionné par poly(A)+ amorcé avec de l’oligo(dT), des amorces aléatoires ou une amorce spécifiquement génétique. Ensuite, vous exécutez la PCR dans un tube séparé avec des amorces spécifiques pour le gène d’intérêt.