Invitrogen™ Utilisation du système SuperMix premier brin III SuperScript™

Le super mélange de synthèse premier brin SuperScript™ III est une formulation SuperMix optimisée pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir du poly(A)⁺ purifié ou de l’ARN total. Ce système permet de détecter les cibles d’ARN de 100 bp à >12 kb. La quantité de produit de départ peut aller de 0,1 pg à 5 µg d’ARN total.

Utilisation du super mélange de synthèse premier brin SuperScript™ III
Le kit comprend le mélange enzymatique SuperScript™ III / RNaseOUT™, Reaction Mix première souche 2X et un tampon d’hybridation. La transcriptase inverse SuperScript™ III, qui figure dans le mélange d’enzymes, est une version de M-MLV RT qui a été conçue pour réduire l’activité RNase H et procurer une meilleure stabilité thermique. L’enzyme peut être utilisée pour synthétiser l’ADNc à des températures s’échelonnant entre 45 et 55°C, offrant une meilleure spécificité, des rendements d’ADNc supérieurs et davantage de produit pleine longueur que d’autres transcriptases inverses. Dans la mesure où la SuperScript™ III RT n’est pas inhibée sensiblement par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, elle peut être utilisée pour synthétiser de l’ADNc à partir de l’ARN total. L’inhibiteur d’ARNase recombinant RNaseOUT™ est compris dans le mélange d’enzymes pour protéger contre la dégradation de l’ARN cible due à une contamination de la ribonucléase. Le mélange de réactions premier brin 2X comprend 10 mM de MgCl₂ et 1 mM de chaque dNTP dans une formulation de tampon optimisée pour la synthèse premier brin d’ADNc. Le tampon d’hybridation est utilisé dans l’étape d’hybridation du modèle / amorce initial. Des tubes distincts de l’oligo(dT)₂₀ et des hexamères aléatoires sont également fournis. L’ADNc peut être synthétisé en utilisant l’ARN total ou l’ARN sélectionné par poly(A)⁺ amorcé avec de l’oligo(dT) ou des amorces aléatoires ou génétiques.