Invitrogen™ Système de synthèse premier brin SuperScript™ III

Le système de synthèse premier brin SuperScript™ III pour la RT-PCR est optimisé pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir de poly(A)⁺ purifié ou d’ARN total. Ce système permet de détecter les cibles d’ARN de 100 bp à >12 kb. La quantité de produit de départ peut aller de 1 pg à 5 µg d’ARN total. La transcriptase inverse SuperScript™ III est une version de RT M-MLV conçue pour réduire l’activité RNAse H et procurer une meilleure stabilité thermique Cette enzyme peut être utilisée pour synthétiser de l’ADNc à des températures allant de 42 à 55°C, offrant une meilleure spécificité, des rendements d’ADNc supérieurs et davantage de produit de pleine longueur que d’autres transcriptases inverses. Comme la RT SuperScript™ III n’est pas significativement inhibée par l’ARN ribosomal et de transfert, elle peut être utilisée pour synthétiser l’ADNc premier brin à partir d’une préparation d’ARN total.

Utilisation du système SuperScript™ III premier brin
La synthèse d’ADNc est effectuée dans un premier temps avec de l’ARN total ou de l’ARN sélectionné par poly(A)⁺ amorcé avec de l’oligo(dT), des amorces aléatoires ou une amorce génétique. Dans un deuxième temps, la PCR est effectuée dans un tube distinct à l’aide d’amorces propres au gène d’intérêt. Pour la réaction de PCR, nous recommandons l’un des ADN polymérases suivants : L’ADN polymérase Platinum™ Taq offre des conditions d’activation à chaud automatique pour une spécificité accrue allant jusqu’à 4 kb, l’ADN polymérase Platinum™ Taq haute-fidélité offre un rendement accru et une haute fidélité pour des cibles allant jusqu’à 15 kb, et l’ADN polymérase Platinum™ Pfx offre une fidélité maximale pour des cibles allant jusqu’à 12 kb.