Invitrogen™ TOPO™ TA Cloning™ Kit for Sequencing, with pCR™4-TOPO™ Vector, One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli, and PureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit

Les kits TOPO™ TA Cloning™ pour séquençage utilisent le vecteur TA pCR4-TOPO™ avec des sites d’amorce de séquençage spécifiquement conçus, qui permettent, pour chaque réaction, d’augmenter la séquence d’insert et de réduire celle du vecteur. Ces kits incluent tout ce dont vous avez besoin pour cloner et sélectionner les vecteurs recombinants contenant le fragment de PCR de votre choix.

• Augmentation des séquences : permet d’augmenter la séquence d’insert et de réduire la séquence de vecteur lors de l’utilisation d’amorces de séquençage standard
• Simplicité et rapidité : passez de la PCR aux clones en 3 étapes en un temps opérateur inférieur à 5 minutes
• Efficacité : obtenez jusqu’à 95 % de clones avec le bon insert
• Éprouvé : performances fiables pendant plus d’une décennie avec plus de 4 000 citations

Présentation des kits TOPO™ TA Cloning™ pour le kit de séquençage

• VECTEUR : vecteur TA pCR4-TOPO™ : vecteur de clonage optimisé pour améliorer les résultats de séquençage
• MÉTHODE DE CLONAGE : Clonage TA TOPO™ : ligature en 5 minutes basée sur la topoisomérase I des produits PCR avec des saillies de 3´A (amplification Taq) sur le vecteur
• CELLULES COMPÉTENTES : Plusieurs options : faites votre choix parmi les kits qui proposent des cellules compétentes générales, à efficacité élevée, résistantes au bactériophage T1 ou à croissance rapide

Vecteur TA pCR4-TOPO™ : optimisé pour le séquençage
Une grande partie du site de clonage multiple du vecteur TA pCR4-TOPO™ a été supprimée pour raccourcir la distance entre les sites d’amorce de séquençage et le site d’insertion à seulement 33 bp. Résultat : les réactions de séquençage diminuent la séquence de vecteur et augmentent celle de l’insertion. Le vecteur TA pCR4-TOPO™ comprend des sites pour 4 amorces de séquençage communes : M13 direct, M13 inverse, T7 et T3. Les kits incluent une aliquote de chaque.

Sélection et manipulation des clones TA pCR4-TOPO™
Le vecteur TA pCR4-TOPO™ contient à la fois des Marquages de résistance à l’ampicilline et à la kanamycine et une fusion de gènes LacZα-ccdB pour la sélection positive et le sélection bleu/blanc. Le site de clonage multiple minimisé du vecteur inclut toujours des sites EcoRI de flanquement pour l’excision simplifiée des produits de PCR clonés et un site Sse8387I unique pour la génération des suppressions imbriquées avant le séquençage. Les accélérateurs T7 et T3 sont également présents pour la transcription in vitro.

Clonage basé sur TOPO™ simplifié
Grâce à la technologie de clonage TOPO™, il n’est pas nécessaire d’utiliser des amorces pour PCR contenant des séquences spécifiques ou des procédures post-PCR, de préparer des vecteurs ou d’effectuer d’autres étapes de manipulation d’ADN chronophages. Il suffit d’ajouter votre réaction PCR directement dans le vecteur chargé en topoisomérase, d’incuber pendant 5 minutes et de la transformer avec les cellules compétentes E. coli fournies.

Clonage efficace
Avec jusqu’à 95 % de clones porteurs de l’insert désiré, vous n’avez plus besoin d’analyser autant de clones, ce qui vous permet de gagner du temps et de l’argent. Le vecteur TA pCR4-TOPO™ utilisé dans ce kit est doté de saillies 3´T pour la ligature efficace de produits PCR amplifiés par Taq et dotés de saillies 3´A.

La norme en matière de clonage
En matière de clonage, la technologie de clonage TOPO™ est un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Rapide, simple d’utilisation et efficace, le clonage TOPO™ a été appliqué à de nombreux vecteurs différents pour un large éventail d’applications. Le kit TOPO™ TA Cloning™ pour le séquençage peut être acheté avec une vaste gamme de cellules compétentes offrant différents avantages en fonction de vos besoins :