Thermo Scientific™ Kit d’essai de coactivateur LanthaScreen™ TR-FRET ER alpha

Le kit d’analyse de coactivateur alpha LanthaScreen™ TR-FRET ER utilise un domaine de liaison de ligands alpha ER (alpha-LBD ER) marqué avec la glutathion-S-transférase (GST), un anticorps anti-GST marqué au terbium (Tb) et un peptide de coactivateur marqué à la fluorescéine dans un format de dosage homogène de type mélange et lecture.

Mode agoniste

Pour exécuter le test de coactivateur alpha LithaScreen TR-FRET ER en mode agoniste (pour identifier les composés agonistes), l’alpha-LBD ER est ajouté aux composés d’essai de ligand, suivi d’un mélange du peptide de coactivateur fluorescéine et de l’anticorps anti-GST marqué par Tb. Après incubation à température ambiante, le rapport d’émission TR-FRET 520:495 nm est calculé et utilisé pour déterminer le CE50 à partir d’une courbe de réponse de dose du composé. Basé sur la biologie de l’interaction du peptide coactivateur alpha ER, ce ligand EC50 est une valeur composite représentant la quantité de ligands nécessaire pour se lier au récepteur, effectuer un changement conformationnel et recruter un peptide coactivateur.

Mode antagoniste

Pour exécuter le test de coactivateur alpha LanthaScreen TR-FRET ER en mode antagoniste (pour identifier les composés antagonistes), l’alpha-LBD ER est ajouté aux composés d’essai des ligands, suivi d’un mélange d’agoniste, de peptide de coactivateur fluorescéine et d’anticorps anti-GST marqué par le terbium (Tb). La concentration d’agoniste utilisée dans ce mode est la concentration EC80, comme déterminé par la première exécution du dosage en mode agoniste.