Thermo Scientific™ Kit EMSA chimiluminescent LightShift™

Le kit comprend des réactifs pour paramétrer et personnaliser les réactions de liaison à l’ADN, un ensemble de contrôles de l’extrait d’ADN et de protéines pour tester le système du kit, le conjugué streptavidine-HRP stabilisé pour vérifier la cible biotinylée d’ADN et un module de substrat chimiluminescent extrêmement sensible à des fins de détection. Le principe de la détection EMSA LightShift™ est semblable à celui d’un transfert Western. L’ADN en duplex marqué aux extrémités par la biotine est incubé avec un extrait nucléaire ou un facteur purifié et soumis à l’électrophorèse sur un gel natif. L’ADN est ensuite transféré rapidement (30 minutes) vers une membrane de nylon positive, réticulé aux UV, analysé avec le conjugué streptavidine-HRP et incubé avec le substrat. Du marquage jusqu’aux résultats, le protocole peut être terminé en un jour. Pour effectuer ce dosage, il suffit de se procurer une cible d’ADN purifié et marqué aux extrémités par la biotine, un extrait de protéine à tester, une membrane de nylon et des équipements d’électrophorèse de base. Les cibles d’ADN peuvent être synthétisées avec des marqueurs de biotine 5’ ou 3’, ou encore marquées après la synthèse à l’aide du kit Thermo Scientific de marquage d’ADN à la biotine sur l’extrémité 3’ (réf. 89818). Plusieurs méthodes permettent d’obtenir des extraits protéiques de cellules nucléaires, cytosoliques ou entières. Parmi ces méthodes, citons le kit de réactif d’extraction nucléaire et cytoplasmique Thermo Scientific NE-PER (réf. 78833).

Points clés :

• Comprend le système de contrôle EBNA pour aider les nouveaux utilisateurs à développer un dosage opérationnel et à comprendre les méthodes utilisées pour confirmer la spécificité des interactions de liaison
• Excellent pour détecter les protéines faiblement abondantes dans les extraits nucléaires
• Sensibilité qui surpasse les méthodes radioactives et de marquage à la digoxigénine
• Compatible avec des conditions de liaison précédemment établies pour des interactions courantes entre l’ADN et les protéines