Invitrogen™ Ester Alexa Fluor™ 430 NHS (ester succinimidyle)

En plus de formulations de colorants réactifs, Invitrogen offre le colorant Alexa Fluor™ 430 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules.

L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de l’Alexa Fluor™ 430 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH₂) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Le conjugué Alexa Fluor™ résultant présentera une fluorescence plus lumineuse et une photostabilité plus élevée que les conjugués d’autres fluorophores similaires sur le plan spectral.

Informations détaillées concernant cet ester NHS AlexaFluor™ :

Marqueur fluorophore : Colorant Alexa Fluor™ 430

Groupe de réactifs : Ester NHS

Réactivité : Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines

Ex/Em du conjugué : 430/545 nm

Coefficient d’extinction : 15 000 cm-1M-1

Poids moléculaire : 701,8

Réaction de conjugaison typique

Conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou n’importe quel peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.

L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissous dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345) et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1–0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.

Purification des conjugués

Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :

Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)

Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 20 à 50 μg (A33087)

Kit de purification de conjugué d’anticorps pour 50 à 100 μg (A33088)

En savoir plus sur le marquage de protéines et d’anticorps

Invitrogen offre une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines Molecular Probes™ pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale.