Molecular Probes™ Kit de dosage MitoProbe™ JC-1

Le kit de dosage MitoProbe™ JC-1 est un test rapide et fiable utilisé pour détecter les changements des mitochondries par cytométrie de flux.

Consultez un guide de sélection pour tous les dosages d’apoptose pour la cytométrie de flux.

Sélection des changements des mitochondries
Le colorant JC-1 à membrane perméante est largement utilisé dans les études sur l’apoptose pour surveiller la santé des mitochondries. Le colorant JC-1 démontre une accumulation de mitochondries dépendant du potentiel, indiquée par un glissement de l’émission de fluorescence du vert (environ 529 nm) vers le rouge (environ 590 nm). Par conséquent, la dépolarisation mitochondriale est indiquée par une diminution du rapport d’intensité de la fluorescence rouge / vert. Le changement de couleur sensible au potentiel est dû à la formation dépendante de la concentration d’agrégats J rouges fluorescents.

Contrairement à d’autres colorants mitochondriaux qui sont affectés par le potentiel de la membrane plasmatique, le rapport de fluorescence vert à rouge de JC-1 dépend uniquement du potentiel de la membrane et non d’autres facteurs tels que la dimension, la forme et la densité mitochondriales, qui peuvent influencer les signaux de fluorescence à un seul composant. L’utilisation de la détection du rapport de fluorescence permet aux chercheurs de faire des mesures comparatives du potentiel des membranes et de déterminer le pourcentage de mitochondries au sein d’une population qui réagit à un stimulus appliqué.

Indicateur du début de l’apoptose
Une caractéristique distinctive des premiers stades de la mort cellulaire programmée est la perturbation des mitochondries actives. Cette perturbation mitochondriale inclut des changements du potentiel de la membrane et des altérations du potentiel d’oxydoréduction de la mitochondrie. Les changements de potentiel de la membrane sont censés être dus à l’ouverture du pore de transition de perméabilité mitochondriale (MPTP), permettant le passage d’ions et de petites molécules. L’équilibrage des ions qui en résulte conduit à son tour au découplage de la chaîne respiratoire et à la libération de cytochrome c dans le cytosol.

Protocole simple et rationalisé
L’un des plus grands défis à relever pour travailler avec des colorants à double émission comme le JC-1 est la compensation. Le kit de dosage MitoProbe™ JC-1 fournit un perturbateur de potentiel de membrane mitochondriale, CCCP, afin de produire des contrôles de compensation conduisant à un ratio de fluorescence vert à rouge correctement compensé. Le protocole de coloration est simple et facile : incubez les cellules avec le colorant JC-1 puis analysez le signal fluorescent des canaux FITC et PE d’un laser de 488 nm.