Invitrogen™ Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor (BacMam 2.0)

Le capteur de cycle cellulaire Premo™FUCCI est un capteur fluorescent à deux couleurs révélant la progression du cycle cellulaire et la division dans les cellules vivantes. Il permet une analyse précise et sensible du cycle cellulaire de cellules individuelles ou d’une population de cellules par microscopie par fluorescence, cytométrie en flux ou imagerie à haute densité. Le capteur de cycle cellulaire Premo FUCCI est fourni par la technologie BacMam 2.0 hautement efficace, permettant des études de cycle cellulaire dans pratiquement tous les types de cellules. Sous forme prête à l’emploi— il vous suffit d’ajouter, de laisser incuber et l’imageur Premo FUCCI permet une expression transitoire hautement efficace dans les lignées cellulaires, les cellules primaires et les cellules souches.

• Précision : Expression contrôlée par cycle cellulaire d’indicateurs lumineux de GFP et RFP pour l’analyse sur cellules vivantes de cellules individuelles ou de populations
• Extrêmement efficace : >90 % de transduction d’une large gamme de lignées cellulaires de mammifères, y compris les cellules primaires, les cellules souches et les neurones
• Rapide et pratique : Ajoutez simplement le capteur de cycle cellulaire Premo FUCCI à vos cellules dans un milieu complet, laissez incuber pendant la nuit et analysez
• Sûr : Les réactifs BacMam ne s’intègrent pas et ne se répliquent pas dans les cellules de mammifères, manquent d’effets cytopathiques observables et conviennent à la manipulation du niveau de sécurité biologique (BSL) 1

Visualisation simple et rapide du cycle cellulaire
Ajoutez simplement le capteur de cycle cellulaire Premo™ FUCCI prêt à l’emploi à vos cellules dans un milieu complet, incubez pendant la nuit, puis visualisez la progression du cycle cellulaire dans les populations de cellules en utilisant la microscopie à fluorescence, la cytométrie en flux ou des instruments d’imagerie à haut contenu. Les cellules passent du rouge dans le G1 au jaune dans l’interphase G1/S et au vert dans les phases S, G2 et M, car les fusions d’emGFP et de TagRFP couplées à deux protéines régulées par le cycle cellulaire sont exprimées et dégradées.
Comment ça fonctionne
Premo FUCCI est dérivé de l’indicateur de cycle cellulaire d’ubiquitination par fluorescence (FUCCI), développé par Miyawaki et ses collègues. Le FUCCI est basé sur deux protéines régulées par le cycle cellulaire, la géminine et la Cdt1, fusionnées respectivement à une protéine fluorescente verte (emGFP) et rouge (TagRFP). Comme le Cdt1 et la géminine ne sont présents que pendant des phases spécifiques du cycle cellulaire, le partenaire protéique fluorescent dépend également du cycle cellulaire. L’ubiquitination par des ligases ubiquitine E3 spécifiques cible les constructions de fusion dans le protéasome pour la dégradation. Les ligases E3 présentent une régulation temporelle de l’activité, ce qui entraîne un cycle biphasique des niveaux de géminine et de Cdt1 pendant le cycle cellulaire. La géminine-GFP est dégradée en phase G1 ; la présence de Cdt1-TagRFP est indiquée par une fluorescence rouge dans les noyaux. Cependant, au cours des phases S, G2 et M, le Cdt1  est dégradé, laissant uniquement la géminine GFP, ce qui donne des noyaux de cellules verts fluorescents. Pendant la transition G1/S, lorsque les niveaux de Cdt1 diminuent et que les niveaux de géminine augmentent, les deux protéines sont présentes, ce qui génère un signal nucléaire jaune fluorescent. Ce changement de couleur dynamique (rouge à jaune à vert) affiche clairement la progression lors du cycle et de la division cellulaires.

Propulsé par la technologie BacMam 2.0
La technologie BacMam est basée sur un virus d’insecte (baculovirus) pour une transduction efficace et une expression transitoire dans les cellules de mammifères. Le capteur de cycle cellulaire Premo™ FUCCI utilise la technologie BacMam 2.0 pour permettre des études de cycle cellulaire dans pratiquement tous les types de cellules, des lignées cellulaires aux cellules souches par incorporation d’une cassette d’expression mammifère pour la construction FUCCI. En comparaison à la technologie BacMam 1.0, la technologie BacMam 2.0 ne nécessite pas d’amplificateur et peut être utilisée en milieu complet. Il n’est pas nécessaire de purifier le plasmide ou de se soucier de l’intégrité et de la qualité des vecteurs. Il n’est pas nécessaire de disposer de lipides, de produits chimiques pour colorant de charge ou d’autres traitements potentiellement dangereux. La version BacMam 2.0 comprend des éléments qui améliorent considérablement l’efficacité de la transduction et les niveaux d’expression: une protéine de capside pseudotypée pour une entrée cellulaire plus efficace, un promoteur CMV amélioré et l’élément régulateur post-transcriptionnel de l’hépatite Woodchuck (WPRE).

Expression titrable qui dure jusqu’à deux semaines
L’expression transitoire du transgène dure d’environ 5 jours dans des lignées cellulaires transformées à jusqu’à deux semaines dans des cellules à division lente, telles que certains types de cellules primaires; nous avons imaginé des neurones différenciés en phase terminale plus de trois semaines après la transduction. En outre, la technologie BacMam garantit une optimisation définie car elle vous permet de titrer précisément les niveaux d’expression. Les baculovirus ne se répliquent pas dans les cellules de mammifères et les gènes viraux ne sont pas exprimés, garantissant ainsi un excellent profil d’innocuité et une absence d’effets cytopathiques sur les cellules de mammifères.

Analyse cellulaire, cycle cellulaire, prolifération cellulaire, viabilité cellulaire, prolifération et fonction, imagerie cellulaire, immunocytochimie (ICC), immunofluorescence (IF)