Invitrogen™ Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 647 Protein Synthesis Assay Kit

Le kit de dosage de synthèse de protéines Click-iT™ Plus OPP Alexa Fluor™ 647 fournit une méthode rapide, sensible et non radioactive pour la détection de la synthèse des protéines à l’aide de la microscopie par fluorescence ou de l’imagerie à haut contenu. Dans ce dosage, l’O-propargyl-puromycine (OPP) est efficacement incorporé aux protéines nouvellement transformées dans des milieux complets contenant de la méthionine et marqué par fluorescence à l’aide d’un colorant Alexa Fluor™ brillant et photostable lors d’une réaction à clic léger rapide et hautement spécifique.

Caractéristiques du kit :

• Aucun changement de milieu nécessaire : les travaux sont effectués dans un milieu complet contenant de la méthionine ; il n’est pas nécessaire de supprimer le milieu cellulaire
• Multiplexage : la technologie Click-iT™ Plus conserve le signal de GFP et la liaison des phalloïdines conjuguées par fluorescence
• Non radioactif : une méthode alternative à la méthionine ³⁵S, une technique traditionnelle
• Utilisation in vivo : les résultats publiés ont démontré que cette technique peut être utilisée in vivo pour déterminer la traduction des protéines

Le kit contient de l’O-propargyl-puromycine (OPP), un analogue à l’alcyne de la puromycine (également disponible séparément), ainsi que de l’azoture de picolyle Alexa Fluor™ 647 et tous les réactifs nécessaires pour effectuer une réaction « clic ». L’OPP se nourrit de cellules cultivées. Il est incorporé dans des protéines pendant la protéosynthèse active. L’ajout de l’azoture de picolyle Alexa Fluor™ 647 et des réactifs de réaction de clic conduit à une ligature chimiosélective, ou réaction de type “clic”, entre le colorant d’azoture de picolyle et l’alcyne OPP, permettant de détecter les protéines modifiées par une analyse basée sur des images.

La réaction de clic utilise des fractions bioorthogonales (biologiquement uniques) pour marquer les cellules proliférantes par fluorescence, ce qui contribue à produire des milieux faibles et des sensibilités de détection élevées. Grâce aux conditions de réaction douces, les dosages Click-iT™ Plus détectent les événements de traduction des protéines tout en permettant la préservation de la morphologie des cellules, la liaison de la phalloïdine marquée par fluorescence et le signal fluorescent de GFP.

Contrairement à la méthionine ³⁵S, utilisée dans les méthodes traditionnelles, la OPP n’est pas un analogue d’acides aminés, de sorte qu’elle peut être ajoutée directement aux cellules dans un milieu complet ou utilisée pour déterminer la synthèse des protéines in vivo.

Le kit contient tous les composants nécessaires au marquage et à la détection de l’OPP incorporé dans les protéines nouvellement traduites dans des échantillons de cellules adhérentes. Le kit contient suffisamment de réactifs pour marquer 25 lamelles de 18 mm × 18 mm en utilisant 1 ml de tampon de réaction par test.