Invitrogen™ NovaBright™ Phospha-Light™ EXP Assay Kit for SEAP (Secreted Placental Alkaline Phosphatase) Reporter Gene Detection

La détection sensible de l’enzyme d’expression de la phosphatase alcaline permet un grand nombre d’applications dans de nombreux domaines de la recherche en sciences de la vie, notamment l’expression génétique, les dosages de la fonction virale, le développement de vaccins, le développement de vecteurs viraux et les méthodes de livraison de gènes pour la thérapie génique, la surveillance de l’expression génétique in vivo et les dosages fonctionnels de nouvelles cellules. Ce dosage SEAP est l’une des méthodes les plus simples et les plus rapides pour optimiser l’efficacité de la transfection. Ce dosage a été utilisé pour une grande variété d’essais fonctionnels viraux, y compris les dosages d’expression génétique virale, la réplication virale, la fusigénicité virale, la neutralisation virale et la fusion cellulaire-cellulaire médiée par le virus, et l’infectivité virale. L’utilisation de la protéine rapporteur SEAP est très favorable aux dosages de gènes rapporteurs in vivo, en dosant des échantillons de sérum provenant d’animaux transgéniques, transfectés ou infectés par un vecteur viral. Le système de dosage de gènes rapporteurs NovaBright a été utilisé pour mesurer les niveaux de SEAP dans les sérums d’animaux entiers transfectés ou transgéniques, notamment la souris, le rat, le marmouset, les sérums de singe et de porc et dans le liquide allantoïque d’œuf de poulet. La protéine SEAP de souris (mSEAP) a récemment été développée pour améliorer la stabilité des protéines SEAP chez les souris transgéniques et le dosage SEAP NovaBright a été utilisé pour la détection sensible de mSEAP. En plus des applications du gène rapporteur (expression génétique), le système de dosage est utilisé pour mesurer le SEAP comme rapporteur fonctionnel pour les dosages de liaison récepteur-ligand avec une chimère SEAP-ligand, une sécrétion médiée par protéase et pour l’activité de la voie de sécrétion. Le système de dosage NovaBright peut être utilisé pour la mesure cellulaire de la phosphatase alcaline non placentaire en tant que biomarqueur.

Ce kit fournit une procédure beaucoup plus simple que les autres dosages. Le dosage est homogène et ne nécessite que deux solutions qui sont toutes deux prêtes à l’emploi. La cinétique d’émission prolongée de lumière luminescente offre un signal de lumière stable pour une flexibilité en lecture-temps. Le signal de dosage est mesuré dans un luminomètre simple sans injecteurs. Le SEAP est une protéine rapporteur sécrétée dans le milieu de culture cellulaire et détectée par des tests d’aliquotes du milieu. Puisque le SEAP est libéré dans le milieu, la lyse cellulaire est inutile. Cependant, le dosage permet également la détection de l’isoenzyme de la phosphase alcaline placentaire (PLAP) après la lyse cellulaire.

• Dosage de gènes rapporteurs chimiluminescents de deuxième génération
• Protocole simple et rapide, compatible avec le haut débit
• Détection ultrasensible de la phosphatase alcaline placentaire sécrétée
• Compatibilité avec les plates-formes automatisées avec les solutions/positions de déclenchement déjà en place

• Méthode de détection : Chimiluminescence
• À utiliser avec équipement : Luminomètre (microplaque)
• Format : Plaque de 96 puits
• Compatibilité avec le haut débit : Compatible avec le haut débit
• Affichage : Point final
• Substrat : CSPD
• Propriétés du substrat : Substrat chimique
• Type de substrat : Substrat de phosphatase alcaline
• Enzyme cible : Phosphatase alcaline placentaire