OPTIZYME™ AloI, Fisher BioReagents™

5’...^ ₇(N) G A A C (N)₆ T C C (N)_12-13^...3’
3’...^_12-13(N) C T T G (N)₆ A G G (N)₇ ^...5’

Fourni avec : Tampon OPTIZYME 10X5
Conditions pour 100 % d’activité :

• 1Tampon X OPTIZYME 5 : 10 mM de tris-HCl (pH 8,5 à 37°C), 10 mM de MgCl₂, 100 mM de KCl et 0,1 mg/ml de BSA
• Laissez incuber à 30°C

• Tampon 1 : 0 - 20 %
• Tampon 2 : 0 - 20 %
• Tampon 3 : 0 - 20 %
• Tampon 4 : 20 - 50 %
• Tampon 5 : 100 %

• 10mM de tris-HCl (pH 7,4 à 25°C), 100 mM de KCI, 1 mM de DTT, 1 mM d’EDTA, 0,2 mg/ml de BSA et 50 % (v/v) de glycérol

• L’incubation à 37°C se traduit par une activité de 20 %.
• AloI produit des coupes double brin des deux côtés depuis le site de reconnaissance interrompu. Sa fonction exclusive est un point de clivage dégénéré sur le côté 3’ de la séquence de reconnaissance (à 12 ou 13 nucléotides).
• La présence de S-adénosylméthionine dans le mélange réactionnel se traduit par un clivage incomplet avec AloI.
• Une digestion avec un excès de 10 fois de AloI peut induire une activité Star.
• AloI peut rester associée à l’ADN clivé. Cela peut provoquer un décalage de la bande d’ADN pendant l’électrophorèse. Pour éviter de voir des bandes d’ADN atypiques, utiliser le colorant de charge d’ADN 6X et une solution SDS pour la préparation des échantillons, ou chauffer l’ADN digéré en présence de SDS avant l’électrophorèse.

• 5’...GAAC(N)₄Gm6A TCC...3’

• 5’...GAAC(N)₆TCm5CW GG...3’

• 5’...m5C GAAC(N)₆TCC...3’

• 5’...GAAC(N)₆TCm5C G...3’

• 5’...GAAm5C G(N)₅TCC...3’