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Thermo Scientific™ Kit de clonage pENTR™/D-TOPO™
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Quantité:
20 réactions
Conditionnement:
1 kit
Description
- Les kits de clonage pENTR™/D-TOPO™ utilisent une stratégie de clonage extrêmement efficace et réalisée en 5 minutes (clonage TOPO™) pour cloner directionnellement un produit de PCR à extrémités franches dans un vecteur afin de pénétrer dans le système Gateway™ ou le système MultiSite Gateway™. Les produits PCR à extrémités franches clonent directionnellement avec une efficacité supérieure à 90 %, sans nécessiter de ligase, de procédures post-PCR ou d’enzymes de restriction.
- Prêt pour le système Gateway™ : les gènes clonés font rapidement la navette entre de multiples systèmes de vecteurs
- Rapide et simple : passez de la PCR au clone d’entrée Gateway™ en juste 3 étapes et en à peine 5 minutes
- Efficace : réussissez plus de 90 % de clones avec l’insert correct et dans la bonne direction
- Éprouvé : performances fiables depuis plus d’une décennie
- Pour l’accès au système Gateway™, il vous suffit d’amplifier par PCR le gène qui vous intéresse et d’ajouter le produit directement au vecteur pENTR™/D-TOPO™ chargé de la topoisomérase fournie. Incubez 5 minutes et transformez les cellules E. coli compétentes fournies. Les clones d’entrée Gateway™ ainsi obtenus et contenant les sites attL sont prêts pour une recombinaison efficace avec les vecteurs de destination Gateway™ de votre choix.
- Le vecteur pENTR™ / D-TOPO™ (Figure 1) comprend les sites de séquençage des amorces M13 et T7 et les sites de recombinaison attL flanquant le site d’insertion des produits de PCR. Cela vous permet de vérifier facilement le séquençage des clones et de les recombiner en vecteurs de destination Gateway™ contenant les sites attR de votre choix. Un gène de résistance à la kanamycine et une origine de plasmide pUC sont utilisés pour la sélection et la propagation en nombre élevé de copies dans E. coli.
- Avec la technologie de clonage directionnel TOPO™, il n’est pas nécessaire de purifier la PCR, de préparer les vecteurs ou de passer par d’autres étapes de manipulation d’ADN longues. Ajoutez simplement votre réaction de PCR directement au vecteur chargé de topoisomérase fourni, incubez 5 minutes, transformez et obtenez jusqu’à 90 % de clones insérés directionnellement. Une saillie à quatre bases sur les paires de vecteurs avec une séquence à quatre bases conçue dans l’amorce directe utilisée pour votre réaction de PCR afin de fournir de la directionalité à la réaction de ligature à la topoisomérase (Figure 2).
- La technologie du clonage de recombinaison Gateway™ contourne les limites du clonage conditionné par la restriction, en vous permettant d’accéder à pratiquement tous les systèmes d’expression en à peine une heure, une réaction de recombinaison Gateway™ efficace à 99 % et réversible. La possibilité de déplacer la même séquence d’ADN entre différents vecteurs sans utiliser d’enzymes de restriction, de ligase, d’étapes de sous-clonage, de screening de colonies innombrables ou de re-séquençage vous fera gagner du temps, de l’argent et économiser vos efforts.
- Quand il s’agit de clonage, la technologie de clonage TOPO™ et la technologie de clonage par recombinaison Gateway™ constituent un partenaire fiable pour des milliers de scientifiques depuis plus de dix ans. Clonage TOPO™ et recombinaison Gateway™ rapides, simples à utiliser et efficaces
Spécification
Spécification
| Souche bactérienne ou de levures | TOP10 |
| Type de cellule | E. coli chimiquement compétentes |
| Méthode de clonage | TOPO cloning |
| Contenu et stockage | Le kit de clonage pENTR™ / D-TOPO™ contient le vecteur pENTR / D-TOPO™, des dNTP, une solution saline, de l’eau stérile et des amorces de séquençage M13 universelles Conserver les composants à -20°C. |
| Format | Kit |
| À utiliser avec (application) | Clonage |
| Type de produit | Kit de clonage |
| Accélérateur | T7 |
| Quantité | 20 réactions |
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