Invitrogen™ Kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™

Le kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™ est un nouveau système d’expression de protéines recombinantes basé sur la levure Pichia pastoris. Le kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™ vous offre une bioproduction pratique et économique à partir d’un flacon d’agitation jusqu’à une production de 1 000 litres de votre protéine recombinante. Le kit d’Optimisation de sécrétion PichiaPink™ est livré avec nos nouvelles souches Pichia, les vecteurs pPINK-HC et pPINK-LC, ainsi que les séquences de signaux de sécrétion pour la production de votre protéine.

• Obtenez un kit complet pour commencer la production de protéines dans Pichia pastoris.
• Sélectionnez rapidement vos transformants Pichia grâce à l’auxotrophie et à la sélection des couleurs.
• Réduisez la dégradation des protéines grâce aux souches Pichia pastoris déficientes en protéases.
• Optimisez la sécrétion de protéines avec l’une des 8 séquences de signaux de sécrétion.

Le kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™ est fourni avec :
• Kit de vecteur PichiaPink™ (n° de cat. A11152)
• Ensemble de signaux de sécrétion PichiaPink™ (n° de cat. A11155)
• Ensemble de souches d’expression PichiaPink™ (réf. de cat. A11154)
• Kit de milieux de culture PichiaPink™ (n° A11156)

Une nouvelle façon d’identifier les transformants Pichia
Le kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™ utilise l’auxotrophie de l’adénine pour sélectionner les transformants Pichia. Les souches PichiaPink™ possèdent le génotype ade2 et nécessitent une complémentation avec le gène ADE2 pour se développer sans adénine. L’utilisation d’un marqueur auxotrophe facilite également le maintien des transformants. Aucun antibiotique n’est requis pour maintenir vos transformants.

En outre, vous pouvez sélectionner les transformants Pichia par couleur. Les souches PichiaPink™ non transformées apparaissent sous la forme de colonies roses tandis que les souches PichiaPink™ transformées apparaissent sous la forme de colonies blanches (fig. 1).

Nouveaux vecteurs d’expression pour Pichia
Le kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™ est livré avec le nouveau kit de vecteurs PichiaPink™. Le kit comprend deux vecteurs, pPINK-LC et pPINK-HC. Les vecteurs pPINK sont construits autour du gène ADE2 pour compléter les souches Pichia déficientes en ADE2. Ces deux vecteurs utilisent le promoteur AOX1 induit par le méthanol pour exprimer votre protéine. Le pPINK-LC s’intègre à un faible nombre de copies dans le génome Pichia tandis que le vecteur pPINK-HC s’intègre à un nombre de copies élevé.

Les vecteurs pPINK-LC et pPINK-HC sont compatibles avec l’ensemble de signaux de sécrétion PichiaPink™. En utilisant une ligature à 3 voies, vous pouvez ajouter l’une des 8 séquences de sécrétion à votre gène. Remarque : les vecteurs pPINK expriment par défaut les protéines de manière intracellulaire.

Le kit de vecteurs PichiaPink™ (n° de cat. A11152) et l’ensemble de signaux de sécrétion PichiaPink™ (n° de cat. A11155) peuvent être commandés séparément pour remplir le kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™.

Gardez vos protéines intactes
Le kit d’optimisation de sécrétion PichiaPink™ est livré avec l’ensemble de souches d’expression PichiaPink™. Cet ensemble contient les 4 souches Pichia pastoris à utiliser avec le système d’expression PichiaPink™. Les 4 souches possèdent le génotype ade2. En outre, 3 souches comprennent des knockouts dans 2 gènes de la protéase. Les souches déficientes en protéases réduisent le besoin d’inhibiteurs de protéase lors de la croissance de vos cellules et améliorent le rendement de votre protéine. Testez une seule inactivation de la protéase ou la double inactivation de la protéase pour trouver celle qui vous convient le mieux.

Vous pouvez commander l’ensemble de souches d’expression PichiaPink™ (n° N° A11154) séparément pour recharger le kit d’optimisation de la sécrétion PichiaPink™.

Poches de milieu de support pour démarrer
Le kit de milieux de culture PichiaPink™ est un kit de poches de milieux de culture pratique et préemballé à utiliser avec le kit d’optimisation de la sécrétion PichiaPink™. Le kit de milieux de culture PichiaPink™ contient les milieux nécessaires à la croissance des souches PichiaPink™ des stocks congelés aux cultures prêtes à la transformation et à la sélection. Vous pouvez commander le kit de milieux de culture PichiaPink™ (n° N° A11156) séparément pour recharger le kit d’optimisation de la sécrétion PichiaPink™.

Pourquoi choisir le système d’expression de la levure PichiaPink™ ?
Le système d’expression de la levure PichiaPink™ est basé sur la levure Pichia pastoris. Les avantages de la levure Pichia pastoris sont les suivants : une croissance rapide, un contexte génique bien défini, une formulation simple des milieux et une manipulation aisée. Depuis plus de 30 ans, la levure Pichia pastoris est utilisée par les laboratoires du monde entier pour produire des centaines de protéines différentes de nombreuses espèces, y compris humaines (réf. 1, 2). Le système d’expression de levure PichiaPink™ permet une production de protéines pratique et économique à petite ou grande échelle.

Pour plus d’informations sur l’obtention d’une licence d’utilisation commerciale pour le système d’expression de levure PichiaPink™, veuillez envoyer votre demande à l’adresse outlicensing@lifetech.com.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Non destiné à une utilisation thérapeutique ou diagnostique chez l’animal ou l’humain.

Liens connexes
• En savoir plus sur le système d’expression de levure PichiaPink™.
• En savoir plus sur nos autres systèmes d’expression de protéines.

Références

1. Cereghino JL, Cregg JM. Expression de protéines hétérologues dans la levure méthylotrophe Pichia pastoris. FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66. [PubMed]
2. Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM. Production de protéines recombinantes dans des cultures fermenteuses de la levure Pichia pastoris. Curr Opin Biotechnol. Août 2002;13(4):329-32. [PubMed]