Thermo Scientific™ Active Ras Pull-Down and Detection Kit

Les kits de co-précipitation et de détection GTPase active mesurent l’activation des petites GTPases en les isolant par le biais de leurs effecteurs spécifiques en aval. Des kits spécifiques des GTPases Arf1, Arf6, Cdc42, Rac1, RalA, Rap1, Ras et Rho sont proposés. Le domaine de liaison respectif de l’effecteur en aval de chaque petite GTPase est exprimé sous forme de protéine de fusion GST. Lorsqu’elle est immobilisée sur une résine, cette protéine de fusion sert à co-précipiter la GTPase active (liée au GTP). L’étape de purification par affinité de la technique de co-précipitation s’effectue aisément à l’aide de colonnes à centrifuger pour microcentrifugeuse. Après un simple lavage, la GTPase liée est récupérée par élution de la protéine fusion GST à partir de la résine glutathion, en utilisant un tampon de chargement d’échantillon SDS-PAGE. La GTPase purifiée est alors détectée par Western blot, à l’aide d’un anticorps spécifique fourni dans chaque kit.

Chaque kit GTPase comprend une protéine de fusion GST du domaine de liaison spécifique, ainsi que des activateurs GTPγS et GDP, une résine glutathion-agarose, un tampon de lyse-liaison-lavage, un anticorps primaire, un tampon d’échantillon SDS 2X, des colonnes à centrifuger et des tubes de prélèvement. Chaque kit contient des composants en quantité suffisante pour effectuer 30 dosages de co-précipitation. Les kits sont optimisés pour la détection du transfert Western avec un anticorps secondaire conjugué au HRP (réf. n° 31460, lapin ; réf. n° 31430, souris) à l’aide du substrat chimiluminescent Thermo Scientific SuperSignal™ West Pico (réf. n° 34080).

Points clés :

• Haute sensibilité et haute précision : des réactifs optimisés, les anticorps spécifiques et la procédure de transfert Western garantissent des contrôles précis et des résultats quantitatifs

• Praticité : inutile d’exprimer et de purifier vos propres protéines hybrides GST-PBD ou RBD ou d’utiliser des résines d’affinité d’immunoprécipitation à base d’anticorps coûteuses

• Rapidité : incubation simultanée du lysat cellulaire avec le GST-PBD ou le RBD et la résine de glutathion directement dans une colonne de centrifugation de microcentrifugeuse haute performance

• Simplicité d’utilisation : les réactifs et les conditions d’extraction ont été optimisés pour une réussite immédiate, même pour les nouveaux utilisateurs

• Efficacité : les colonnes de centrifugation et les tubes de prélèvement de la microcentrifugeuse permettent une séparation efficace du liquide et de la résine, ce qui évite la perte d’échantillons

• Complet : les kits comprennent des réactifs pour la purification par affinité ainsi que des contrôles, un tampon de lyse cellulaire compatible et un anticorps primaire spécifique pour la détection finale par transfert Western

Protéines hybrides GST des domaines actifs de liaison à la GTPase :

• Le domaine de liaison à Ras de RAF1 (Raf1-RBD) lie les Ras actives
• Le domaine de liaison à p21 de Pak1 (Pak1-PBD) lie les Rac1 et Cdc42 actives
• Le domaine de liaison à Rho de Rhotekin (Rhotekin-RBD) lie les Rho actives
• Le domaine de liaison à Rap1 de RalGDS (RalGDS-RBD) lie les Rap1 actives
• Le domaine de liaison aux protéines de GGA3 (GGA3-PBD) lie les protéines Arf1 et Arf6 actives
• La protéine de liaison Ral 1 (RalBP1) lie la RalA active

Comprend :

Protéine de fusion GST du domaine de liaison spécifique, résine glutathion-agarose, GTPγS et GDP (100X), tampon de lyse-liaison-lavage, anticorps primaire spécifique anti-GTPase, tampon de chargement de l’échantillon SDS-PAGE (2X), colonnes à centrifuger et tubes de prélèvement