Thermo Scientific™ Pierce™ Coomassie Brilliant Blue Dyes

Les colorants Coomassie R-250 et G-250 sont deux formes chimiques d’un composé de triphénylméthane disulfoné couramment utilisé comme base de coloration pour la détection des protéines dans l’électrophorèse sur gel et les réactifs de dosage de type Bradford pour la quantification des protéines. La forme R-250 (teintée en rouge) est dépourvue des deux groupes méthyles présents sous la forme G-250 (teintée en vert), également appelée colorant Coomassie colloïdal.

Généralement, les colorations de gel de Coomassie et les réactifs de dosage protéique sont formulés en solutions très acides dans du méthanol à 25 à 50 %. Dans des conditions acides, le colorant se lie aux protéines principalement par l’intermédiaire d’acides aminés de base (essentiellement l’arginine, la lysine et l’histidine), et le nombre de ligands de colorant Coomassie liés à chaque molécule de protéine est approximativement proportionnel au nombre de charges positives trouvées sur la protéine. La liaison protéique fait passer le colorant du brun rougeâtre au bleu clair (le maximum d’absorption est égal à 595 nm).

Caractéristiques :
• Détection facile : développe des complexes fortement colorés avec des protéines
• Sensibilité élevée : peut déterminer au minimum 0,5 µg/cm2 de protéines présentes dans une matrice de gel
• Coloration réversible : l’anion du colorant Coomassie bleu brillant formé dans le milieu de coloration acide se combine avec les groupes amino protonés des protéines par interaction électrostatique ; le complexe résultant est réversible dans les conditions appropriées
• Différenciation entre le colorant lié et le colorant non lié : lorsqu’il est dissout dans un tampon citrate 0,01 M à pH 3,0, il a un maximum d’absorption à 555 nm ; le complexe protéine-colorant est caractérisé par un pic légèrement plus large que celui du colorant libre avec un maximum à 549 nm