Thermo Scientific™ Kit d’analyse quantitative de la biotine par fluorescence Pierce™

Ce dosage de biotine à base de microplaques est facile à effectuer en ajoutant le rapporteur fluorescent fourni aux échantillons biotinylés et aux étalons de biocytine dilués. L’avidine produit une fluorescence lorsque l’HABA à interactions faibles (acide 4’-hydroxyazobenzène-2-carboxylique) est déplacé par la biotine. La quantité de biotine est déterminée en comparant la fluorescence de l’échantillon à la courbe étalon de biocytine. Ce dosage nécessite beaucoup moins de volume d’échantillon que le dosage HABA colorimétrique des microplaques et est beaucoup plus sensible.

Points clés :

• Rapide : ne nécessite qu’une incubation de 5 minutes
• Économique : ne nécessite que 10 μl d’échantillon (env. 750 ng d’IgG biotinylée)
• Sensible : plage de fonctionnement linéaire de 10 à 60 picomoles de biotine

Comprend :

Tampon de dosage, solution de rapporteur fluorescent HABA-avidine et contrôle de la biocytine

Matériel nécessaire :

Microplaque à 96 puits opaque noire et lecteur de plaques de fluorescence (excitation 494 nm ; émission 520 nm)

Détails du produit :

L’interaction hautement spécifique de l’avidine ou de la streptavidine avec la biotine est à la base de nombreux systèmes de purification et de détection. Il est nécessaire de quantifier le degré de biotinylation pour évaluer si une procédure d’étiquetage de la biotine a réussi et quelle quantité de molécule biotinylée utiliser pour une application spécifique. HABA (acide 4’-hydroxyazobenzène-2-carboxylique) est un colorant qui interagit faiblement avec l’avidine et qui est couramment utilisé dans un dosage colorimétrique pour estimer rapidement le rapport biotine-protéine. Le kit de quantification de la biotine par fluorescence utilise également du colorant HABA, mais il est plus sensible et précis. Un prémélange d’avidine fluorescente avec HABA (DyLight Reporter) est ajouté à la solution contenant l’échantillon biotinylé. En raison de sa plus grande affinité pour l’avidine, la biotine déplace le HABA, permettant ainsi à l’avidine de produire une fluorescence. La quantité de biotine est mesurée dans une microplaque en comparant la fluorescence à une courbe étalon de biocytine. Le kit de quantification de la biotine par fluorescence ne nécessite que 10 μl d’échantillon. Par comparaison, la méthode colorimétrique traditionnelle nécessite 100 μl d’échantillon et un autre kit de dosage par fluorescence de premier plan nécessite 50 μl d’échantillon. Notre kit est plus précis que le dosage de biotine fluorescente de l’autre fournisseur.