Thermo Scientific™ Pierce™ Colorimetric Protease Assay Kit

Ces kits de dosage des protéases par colorimétrie et fluorescence permettent de mesurer l'activité protéase totale dans des échantillons biologiques par deux méthodes différentes. Les deux kits peuvent être utilisés pour évaluer l'évolution des procédures d'isolement des protéases ou pour quantifier la contamination par des protéases dans des échantillons biologiques. Le substrat de protéase de ces kits est une caséine succinylée ou marquée par la fluorescéine. La protéolyse du substrat génère des peptides dont les groupes amino ou les propriétés de fluorescence altérées permettent la détection dans les kits respectifs. L'activité protéase est quantifiée par une comparaison avec un étalon de trypsine inclus dans chaque kit.

Points clés :

• Substrat de caséine : mesure l’activité de toute protéase qui clive la caséine en fragments de peptides

• Étalon de trypsine : quantifie l’activité de la protéase par rapport à la trypsine, une référence universellement acceptée

• Sensible : 1 000 fois plus sensible que les dosages qui utilisent des formes de caséine non modifiées

• Simple et rapide : les protocoles en tube à essai ou sur microplaque sont réalisés en moins d’une heure

• Homogène : étapes d’addition uniquement ; aucune étape de séparation, de transfert ou d’interruption n’est requise

• Personnalisable : la durée, la température et le pH peuvent être facilement adaptés afin d’optimiser la sensibilité exigée par des protéases d’intérêt

Le substrat du kit de dosage des protéases par colorimétrie (N° Réf. 23263) est une caséine totalement succinylée. En présence de protéases, l'hydrolyse de ce substrat entraîne la libération de fragments peptidiques comportant des groupes amino-terminaux libres. Ces peptides sont mis en réaction avec de l'acide trinitrobenzène sulfonique (TNBSA), suivi par une mesure de l'augmentation de l'absorbance découlant de la formation d'adduits TNB-peptide de couleur jaune.

• Substrat : caséine succinylée (non disponible séparément)
• Base du dosage : détection des amines primaires suite à une protéolyse
• Réactif de détection : acide trinitrobenzène sulfonique (TNBSA)
• Mesure : absorbance à 450 nm (lecteur de plaques ou spectrophotomètre)

Le substrat du kit de dosage des protéases par fluorescence (N° Réf. 23266) est une caséine marquée par la fluorescéine qui permet d’évaluer l’activité protéase dans un échantillon par deux méthodes : le transfert d’énergie de fluorescence par résonance (FRET) avec un fluorimètre standard ou la polarisation de fluorescence (FP) avec un instrument spécifique. La caséine-FITC est une caséine native qui a été marquée en utilisant un large excès molaire d'isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Les propriétés de fluorescence de ce substrat protéique intact, fortement marqué, sont considérablement modifiées suite à une digestion par des protéases, ce qui offre une indication mesurable de la protéolyse.

• Substrat : caséine marquée par la fluorescéine (FITC-caséine) ; disponible séparément sous le N° Réf. 23267
• Base du dosage : modification de la fluorescence par résonance (FRET) ou de la polarisation de fluorescence (FP)
• Mesure : instrument équipé de filtres d’excitation et d’émission de la fluorescéine (485 / 538 nm)

Comprend :

Caséine modifiée, étalon de trypsine et solution saline tamponnée au Tris (les deux kits) ; solution de TNBSA (N° Réf. 23263 uniquement)

Recommandées dans les cas suivants :

Évaluation de l’intégrité fonctionnelle et de l’évolution globale de la purification des protéases ; Quantification de la contamination d’échantillons protéiques par les protéases ; Caractérisation de l’activité de protéases inhabituelles par comparaison à la trypsine ; Évaluation des conditions tampon pour identifier leurs effets sur la fonction et l’activité des protéases