Invitrogen™ PrestoBlue™ and PrestoBlue™ HS Cell Viability Reagents

Le réactif de viabilité cellulaire PrestoBlue™ HS est une solution à base de résazurine prête à l’emploi qui fonctionne comme un indicateur de santé cellulaire en ayant recours à la puissance de réduction des cellules vivantes pour effectuer une mesure quantitative de la viabilité. En entrant dans les cellules vivantes, la résazurine est réduite à la résorufine, un composé de couleur rouge et très fluorescent. La fluorescence de fond élevée provoquée par divers contaminants réduit les performances des réactifs à base de résazurine. Afin d’améliorer les performances, un procédé de purification innovant a été mis au point pour éliminer ces contaminants. Cette résazurine hautement purifiée et non toxique a été utilisée dans la formulation standard de PrestoBlue, créant ainsi le réactif de viabilité cellulaire PrestoBlue HS. Les changements de viabilité peuvent être facilement détectés à l’aide d’un lecteur de plaques à base d’absorbance ou de fluorescence. Le réactif de viabilité cellulaire PrestoBlue HS a été optimisé pour une détection rapide et fiable de la viabilité des cellules de mammifères.

Les fonctions du réactif de viabilité cellulaire PrestoBlue HS comprennent :

• L’élimination des contaminants de la résazurine— montre une réduction >50 % de la fluorescence de fond
• Le rapport signal-bruit a augmenté de >100 %— donne une grande fenêtre de signal de dosage
• Réactif très sensible avec une réaction linéaire—détecte une quantité aussi faible que 10 cellules par puits
• Format pratique d’ajout-lecture—sans mélange, sans lavage, sans lyse cellulaire et compatible avec les instruments à fluorescence ou à absorbance
• Optimisé pour une détection fiable de la viabilité des cellules de mammifères en seulement 10 minutes

La mesure des changements de la prolifération cellulaire est une méthode fondamentale pour apprécier la santé des cellules, déterminer la génotoxicité et évaluer les médicaments anticancéreux. La santé cellulaire peut être surveillée en détectant les changements de plusieurs indicateurs clés, notamment les changements dans l’intégrité de la membrane plasmique, la synthèse d’ADN, le contenu en ADN, l’activité enzymatique, la présence d’ATP et l’environnement réducteur des cellules.

Le suivi des changements apportés à l’environnement de réduction cellulaire ou à l’activité métabolique à l’aide de réactifs à base de résazurine est un indicateur fiable et bien établi de la viabilité ou de la mort des cellules. En entrant dans les cellules vivantes, l’environnement réducteur réduit la résazurine à la résorufine, un composé de couleur rouge et très fluorescent. Les cellules viables convertissent continuellement la résazurine en résorufine, augmentant ainsi la fluorescence globale du milieu entourant les cellules. En outre, la conversion de la résazurine en résorufine entraîne un changement de couleur prononcé, de sorte que la viabilité cellulaire peut également être détectée à l’aide de lecteurs de plaques à absorbance.

En raison des procédés de synthèse et de fabrication, tous les réactifs à base de résazurine contiennent une quantité détectable de contamination par résorufine. La quantité de contamination peut varier considérablement entre les sources du matériau et les conditions de fabrication, ce qui contribue à des différences dans la fluorescence de fond détectable. Un procédé innovant a été développé pour éliminer la résorufine contaminante, afin d’obtenir la résazurine hautement pure utilisée dans le réactif de viabilité cellulaire PrestoBlue HS. Cette résazurine très pure produit une diminution de >50 % de la fluorescence de fond et une augmentation de >100 % du rapport signal/fond. La viabilité des cellules de mammifères peut être détectée après une incubation de 10 minutes avec le réactif de viabilité cellulaire PrestoBlue HS. Étant donné qu’aucune lyse n’est nécessaire, la solution diluée PrestoBlue HS peut être retirée et remplacée par un milieu de croissance complet, pour poursuivre la culture des cellules.