Melford Protéinase K

Extrait de l'album Tritirachium. Protéase à sérine pour l'inactivation protéolytique des nucléases lors de l'isolement de l'ADN et de l'ARN.

Instructions

La protéinase K est une sérine protéase très réactive qui possède la capacité de digérer les protéines natives, inactivant ainsi des enzymes telles que la DNase et la RNase sans recourir à un processus de dénaturation. Il s'agit de la protéinase la plus puissante parmi toutes les protéinases caractérisées à ce jour. Elle clive la liaison peptidique adjacente au groupe acide carboxylique des acides aminés aliphatiques, aromatiques ou hydrophobes.

La protéinase K recombinante est utilisée dans l'isolement ou la préparation d'acides nucléiques de haut poids moléculaire. Elle est très pure, possède une activité spécifique plus élevée et est plus stable à température ambiante que la protéinase K native.

La protéinase K recombinante est exprimée à partir de la levure Pichia pastoris avec un gène cloné codant pour la protéase endolytique d'Engyodontium album (Tritirachium album) .

Applications

• La protéinase K recombinante est extrêmement efficace sur les protéines natives et peut donc être utilisée pour inactiver rapidement les nucléases endogènes telles que les RNases et les DNases. Cette propriété rend la protéinase K particulièrement adaptée à l'isolement de l'ARN et de l'ADN natifs à partir de tissus ou de lignées cellulaires.
• Utilisé pour l'analyse des structures membranaires par modification des protéines et des glycoprotéines à la surface des cellules.
• Particulièrement adapté à l'isolement des acides nucléiques pour les réactions d'amplification.
• Favorise la lyse cellulaire en activant un facteur autolytique bactérien.
• Utilisé pour éliminer les débris cellulaires lors de la préparation des prélèvements de colonies, et pour traiter les sections de tissus afin d'assurer une infiltration efficace de la sonde lors de l'hybridation in situ.

Recommandations de reconstitution :

Pour la préparation de la solution mère, nous suggérons de reconstituer la poudre lyophilisée dans un tampon (Tris 20 mM, CaCl2 ₁ mM, glycérol 2 %, pH 7,4).

Le calcium est important pour la thermostabilité de la protéinase K et la valeur du pH est essentielle pour une solubilité élevée.

L'utilisation de glycérol cryoprotecteur à une concentration finale de 50 % dans la solution mère vise à prévenir les dommages causés par le gel/dégel. La protéinase K a conservé 99 % de son activité après 12 cycles de congélation/décongélation dans la solution mère. Évitez les cycles répétés de congélation et de décongélation pour prévenir la précipitation des protéines si du glycérol n'est pas ajouté.

La solution de protéinase K reste active sur une large plage de pH (4,0-12,5, souvent utilisée dans la plage de 7,5-9,0) et sur une large plage de température de 25 °C à 75 °C. La solution reste stérile et stable pendant au moins 12 mois à 4 °C.

Attention : la poudre lyophilisée de protéinase K recombinante n'est pas stérile. Une solution mère peut être préparée à une concentration de 20 à 40 mg/mL dans un tampon Tris-HCl 20 mM, stérilisée à l'aide d'un tube à essai de 0,22 µm.μfiltre m. La solution mère peut être conservée dans du glycérol à 50 % en aliquotes dans une large plage de températures allant de 24 °C à -80 °C.

Pour la filtration stérile, nous recommandons l'utilisation de membranes PES ou PVDF à faible liaison aux protéines.

Composition (SANS ADDITIFS) :

• ≥90% Protéine Protéinase K, test biuret.
• Excipients : Saccharose 8 %
• Sans ADN ni ARN
• Sans endotoxines

Caractéristiques:

• Stable et active sur une large plage de pH allant de 4 à 12, son activité maximale se situe entre 7,5 et 12.
• Réagit avec le SDS, l'urée et l'EDTA. La température la plus active est de 65 °C.
• Inactivé par les fluorophosphates de diisopropyle (DFP) et le fluorure de phénylméthanesulfonyle (PMSF).
• Purification : Chromatographie d'affinité au nickel suivie d'une chromatographie d'échange d'ions et d'une dialyse.
• CE : 3.4.21.64