Thermo Scientific™ SILAC Protein Quantitation Kit (Trypsin), RPMI 1640

Les caractéristiques du kit de quantification des protéines SILAC, RPMI 1640 incluent :
• Efficace — intégration d’étiquettes jusqu’à 100 % dans les protéines des cellules vivantes
• Reproducible — élimine la variabilité intra-expérimentale provoquée par la préparation différenciée des échantillons
• Flexible — milieu déficient en L-lysine et L-arginine, qui permet une couverture protéomique plus complète par la biais d’un marquage d’acides aminés isotopiques multiples
• Compatible — marque les protéines exprimées dans une grande variété de lignées cellulaires de mammifères adaptées à la croissance en milieu RPMI 1640, notamment HeLa, 293T, COS7, U2OS, A549, A431, HepG2, NIH 3T3, Jurkat et autres
• Suppléments de haute qualité — acides aminés lourds avec une pureté d’isotope de >99 % ; FBS dialysé testé afin de s’assurer qu’il est stérile, exempt d’endotoxine, et compatible avec la culture cellulaire

Applications du kit de quantification des protéines SILAC :
• Analyse quantitative des variations relatives d’abondance des protéines à partir de différents traitements cellulaires
• Analyse quantitative des protéines pour lesquelles il n’y a pas d’anticorps disponibles
• Profilage de l’expression des protéines de cellules normales par rapport à des cellules anormales
• Identification et quantification de plusieurs centaines à plusieurs milliers de protéines dans le cadre d’une seule expérience.

SILAC est une méthode puissante permettant d’identifier et de quantifier les changements différentiels relatifs dans les échantillons de protéines complexes. Cette approche implique l’intégration métabolique in vivo d’acides aminés “lourds” marqués N ¹³C- ou ¹⁵ dans les protéines, suivie de la spectrométrie de masse (MS) pour l’identification, la caractérisation et la quantification accélérées et complètes des protéines.

Étant donné que les peptides marqués avec des acides aminés lourds et légers sont chimiquement identiques, ils co-éluent pendant le préfractionnement de la colonne en phase inverse et sont donc détectés en même temps pendant l’analyse MS. Les intensités maximales relatives de plusieurs peptides distincts sur le plan isotopique issus de chaque protéine sont ensuite utilisées pour déterminer la variation moyenne de l’abondance des protéines dans l’échantillon traité.

Les kits SILAC de trypsine sont fournis avec¹³C₆ ¹⁵N13C₆ ¹⁵N₄ L-arginine-HCl pour marquer et quantifier les peptides contenant de la lysine et de l’arginine à partir de la digestion protéique de la trypsine. Chaque kit comprend également 2 x 500 ml de sérum moyen et dialysé. Lorsqu’ils sont associés à des produits d’enrichissement d’échantillons de protéines/peptides Thermo Scientific, les kits d’analyse quantitative de protéines Pierce SILAC permettent également d’effectuer une analyse MS des protéines à faible abondance telles que les protéines de surface, les protéines spécifiques aux organites et les modifications de protéines post-translationnelles, telles que la phosphorescente ou la glycosylation.