Invitrogen™ SuperScript™ III CellsDirect™ cDNA Synthesis Kit

Le kit de synthèse d’ADNc SuperScript® III CellsDirect est optimisé pour la synthèse d’ADNc premier brin directement à partir d’un lysat de cellules de mammifères sans d’abord isoler l’ARN. La lyse et la transcription inverse sont effectuées dans le même tube et l’ADNc premier brin qui en résulte est prêt à être utilisé dans le clonage et la PCR. Pour la RT-PCR quantitative, voir la remarque ci-dessous.

Les avantages du kit de synthèse d’ADNc SuperScript® III CellsDirect incluent :

• Compatible avec une large gamme de types de cellules de mammifères cultivées dans différentes conditions de traitement
• Le format à tube unique minimise la perte de réactifs, la perte d’échantillons et le temps de manipulation
• Le volume total de lysat est utilisé dans la réaction de synthèse d’ADNc premier brin, fournissant des rendements plus élevés avec un nombre limité de cellules et permettant la détection de transcrits rares
• La transcriptase inverse SuperScript® III, avec une activité RNase H réduite et une stabilité thermique plus élevée, produit des rendements élevés d’ADNc dans la réaction de synthèse premier brin, pour une plus grande sensibilité et une meilleure détection des transcrits rares
• Génère de l’ADNc de haute qualité pour une utilisation dans une variété d’applications, y compris le clonage et la PCR
• Le protocole simple prend moins de 2 heures

Fonctionnement
Dans la RT-PCR traditionnelle, l’ARN est d’abord isolé des cellules dans une procédure chronophage qui peut entraîner une perte de matériau. Grâce au système de synthèse d’ADNc SuperScript® III CellsDirect, les cellules sont lysées et l’ADNc est généré à partir du lysat dans un tube unique avec une manipulation minimale et aucune perte d’échantillon. La DNase I est ajoutée pour éliminer l’ADN génomique avant la synthèse premier brin. Ce kit a été optimisé pour les échantillons de petites cellules, allant de 10 000 cellules à une seule cellule (mesurée par dilution de série). L’utilisation de la transcriptase inverse SuperScript® III garantit une spécificité et des rendements élevés d’ADNc à partir de petites quantités de produit de départ : seulement 10 pg d’ARN total. Après la synthèse, l’ADNc premier brin peut être amplifié avec des amorces spécifiques par la PCR sans extractions organiques intermédiaires ni précipitations à l’éthanol.