Thermo Scientific™ ADN ligase T4, HC (30 U/μl)

Points clés

• Actif dans les enzymes de restriction Thermo Scientific, la PCR et les tampons de RT (lorsqu’il est supplémenté avec de l’ATP)
• La ligature –rapide de l’extrémité collante est réalisée en 10  minutes à température ambiante
• Fournie avec une solution de PEG pour la ligature efficace de l’extrémité émoussée

Applications

• Clonage des fragments d’ADN générés par l’enzyme de restriction
• Clonage des produits de PCR
• Raccordement des liens d’oligonucléotides bicaténaires ou des adaptateurs à l’ADN
• Mutagenèse dirigée
• Polymorphisme de longueur des fragments amplifiés (AFLP)
• Détection d’ARN ligase (voir  Référence 3)
• Réparation des entailles d’ADN, ARN duplex ou d’ADN / ARN hybrides
• Auto-circularisation de l’ADN linéaire.

Remarques

• La fixation de l’ADN ligase T4 aux fragments d’ADN peut retarder leur migration en gel d’agarose. Afin d’éviter cela, incubez les échantillons avec  une solution de 6X colorants de &charge d’ADN et SDS  à 70°C pour 5 min ou à 65°C pour 10 minutes et refroidissez-les sur de la glace avant l’électrophorèse.
• Le volume de mélange de réaction de ligature ne doit pas dépasser 10 % du volume de cellules compétentes utilisé pour le processus de transformation.
• Avant l’électro-transformation, éliminer l’ADN ligase T4 du mélange de ligation à l’aide d’une colonne à centrifuger ou par une extraction au chloroforme. L’ADN extrait peut être ensuite précipité avec de l’éthanol.