Applied Biosystems™ TaqMan™ Copy Number Reference Assay, mouse, Tert

Les essais de référence du nombre de copies humaines TaqMan™ sont effectués avec les dosages du nombre de copies TaqMan™ dans les réactions en duplex PCR en temps réel afin de détecter et de mesurer les variations du nombre de copies (CNV) et des régions plus petites du génome de souris. Les dosages de référence de numéro de copie TaqMan™ de souris sont également compatibles avec les dosages de numéro de copie TaqMan™ prédéfinis du gène rapporteur et du marqueur de vecteur commun. Pour les gènes pouvant être utilisés comme gènes de référence endogènes chez la souris, deux options sont proposées : Tfrc et Tert. Les dosages de référence du nombre de copies TaqMan™ sont conçus pour isoler les séquences génomiques dans l’assemblage de référence du génome de souris (NCBI version 37/mm9) et sont nécessaires pour l’analyse quantitative relative du nombre de copies cibles.

Les essais du nombre de copies TaqMan™ quantifient les gènes d’intérêt et les normalisent selon un gène de référence endogène connu pour être présent en deux copies dans un génome diploïde. Veuillez noter que les dosages de référence du nombre de copies TaqMan™ sont spécifiques à chaque espèce.

Tert : l’option de gène de référence alternative
Les dosages de référence du nombre de copies TaqMan™ possèdent une sonde TAMRA™ marquée par un colorant VIC™ et des amorces directes et antisens spécifiques à une séquence de référence. Les dosages ne sont pas limités par des amorces antisens.

TaqMan™ Copy Number Reference Assay, Souris, Tfrc est recommandé comme test de référence standard pour l’analyse du nombre de copies chez la souris. Ce dosage détecte le gène récepteur de la transferrine (TFRC) sur le chromosome 16, le cytoband 16qB3. L’emplacement du dosage est le chr.16:32626732 sur NCBI version 37. Il a un amplicon de 91 bp dans l’exon 17 du gène TFRC.

Le dosage de référence du nombre de copies TERT TaqMan™ de souris est un essai de référence alternatif. Il est recommandé dans le cas où l’essai de RNase P fonctionnerait mal sur un échantillon en raison d’une aberration chromosomique ou autres problèmes. Ce dosage cible le gène codant la transcriptase inverse de la télomérase (TERT), situé sur le chromosome 13cytobande 13qC1. L’emplacement du dosage est le chr.13:73778992 sur NCBI version 37. Il a un amplicon de 96 bp qui cartographie dans l’intron 8 du gène TERT.

Flux de travail le plus simple disponible
Les dosages du nombre de copies TaqMan™ présentent le flux de travail le plus simple de toutes les méthodes d’analyse de CNV actuellement disponibles. Le dosage de test (marqué par colorant FAM™), l’essai de référence (marqué par colorant VIC™), votre échantillon d’ADN et le Master Mix TaqMan™ sont associés et appliqués sur un système PCR en temps réel Applied Biosystems™ en suivant le protocole de dosage du nombre de copies TaqMan™ standard. En moyenne, la mise en place de l’analyse primaire ne prend que 3-4 heures (incluant un cycle PCR d’environ 2 heures.

Un logiciel d’analyse de données puissant
Le logiciel CopyCaller™ a été spécifiquement développé pour l’analyse des données de l’essai du nombre de copies TaqMan™. Ce logiciel gratuit et convivial utilise une interface graphique qui calcule rapidement les nombres de copies possibles pour l’ensemble des échantillons d’un cycle. Il apporte également une valeur de confiance pour chaque appel de nombre de copies et dispose d’une fonction de déviance.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Non utilisé à des fins thérapeutiques ou diagnostiques humaines ou animales.